蛋白表达咨询

高温会影响转化效率，你在37摄氏度操作时间越长，效率越低，后续结果越不稳定，建议重新调整操作时间

可能的原因有很多。可能是DNA转化效率不稳定，或者蛋白表达和折叠过程中存在问题，也可能是您的操作问题。以下是一些可能的原因和解决方案：

1.转化效率不稳定：在您的实验中，37摄氏度生长可能会影响BL21(DE3)的转化效率。转化后，应该在室温下快速混合细胞和LB培养基，恢复期一般为1-2小时。然后将细胞在LB/ampicillin板上培养过夜。您可以考虑增加培养时间，以获得更好的转化效率。

2.蛋白表达和折叠问题：mCherry是一个荧光蛋白，需要正确的表达和折叠才能发出荧光。如果表达和折叠存在问题，就会导致荧光强度不稳定。您可以尝试使用其他质粒或菌株表达mCherry，或者对BL21(DE3)中的表达和折叠条件进行优化。

3.操作问题：操作问题也可能导致荧光强度不稳定。例如，荧光染料浓度过高或过低，转化后不够快速地混合细胞和培养基等等。在进行实验时，请确保所有步骤都严格按照协议进行，尽量减少操作误差。

关于mCherry的表达和折叠条件优化，下面是一个参考协议：

1.使用IPTG诱导表达：在LB/ampicillin培养基中培养细胞至OD600=0.6-0.8，添加最终浓度为0.5 mM的IPTG，继续在37摄氏度下培养4小时。

2.质粒浓度的优化：在细胞培养过程中，质粒的浓度可能会影响荧光蛋白的表达和折叠。您可以尝试使用不同的质粒浓度进行表达和折叠条件优化。

3.温度和时间的优化：表达和折叠条件也可以通过温度和时间进行优化。例如，您可以尝试将温度降低到30摄氏度或将表达时间延长至12小时以上。

4.培养基的优化：在表达和折叠条件优化时，不同的培养基可能会对荧光蛋白表达和折叠产生影响，您可以尝试使用不同的培养基进行优化。例如，使用含有氮源和碳源的M9培养基等，可以提供更加简单和有限的培养条件来促进蛋白质的表达和折叠。

5.振荡速度的优化：在实验中，振荡速度也可能影响荧光强度。振荡速度过快可能会影响细胞生长，振荡速度过慢可能会影响培养基的均匀性和氧气供应。建议您优化振荡速度以获得最佳的荧光强度和细胞生长。