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WB（蛋白免疫印迹）
WB（蛋白免疫印迹）
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问
wb转膜之后老是很斑驳
dxyc42u
应该温度高了，有冷库的话放在里面跑
3 回答
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问
做WB时，小分子转膜时间怎么控制？
是TTT
普通Western转膜液200mA，一分钟转1kd，10-30kd转10-30分钟。小分子wb没有条带可能不在于转膜没成功，关键在电泳，可以调整下层胶浓度跑小分子蛋白
4 回答
5541 围观
问
wb无条带求助
balalaLy
一般内参抗体很少出问题，内参不出条带可能是位置不对，或者二抗种属不对。其次，抗体孵育使用的buffer，比如抗体稀释液或者TBST的 ph过高。
3 回答
556 围观
问
求问wb稀释一抗，一般用什么稀释好呢
dxy_a3w222q8
哈哈哈可能我比较穷，我都是用5%的脱脂奶粉做稀释液（5g奶粉+100ml 1X的TBST漂洗液，摇匀，4℃保存，现配现用）来稀释一抗的，用什么封闭就用什么稀释。
12 回答
21881 围观
问
WB最近遇到了好多问题，求帮助！
z流沙z
1、配胶要充分混匀，没有杂质，样品要离心取上清，不要混有颗粒状物质或者细胞沉淀。2-3、小分子蛋白可以配高浓度如15%的胶，减少电泳和转膜时间，比如电泳80v 30min和120v 至分开即可，像你蛋白这么小的转膜200mA 1h完全足够
3 回答
1159 围观
问
做 200kd 以上蛋白的 Western Blot 时注意事项？
bamboopiggy
用8%的胶，甚至可以用6%的胶，转膜时间要相对延长，买分子量差不多的marker，看转膜是否转过去了。
3 回答
773 围观
问
WB结果出现目的蛋白很浅，但actin位点或者Gapdh位点出现很深的条带，什么原因呢
秋秋欣欣
有可能内参荧光太强会遮盖目的荧光
4 回答
602 围观
问
wb怎么根据内参调整上样量
whilt-shirt
先用Image J计算内参的灰度值，然后选择其中一个样本作为参照，用这个参照样本的灰度值除以其他各组样本的灰度值再乘以各组上样量，就得到最终各自的上样量
3 回答
12830 围观
问
WB条带不均一，颜色一半深一半浅是怎么回事？
whilt-shirt
有可能是发光液没加好，也有可能是转膜时问题，还有可能是抗体敷育时条带未完全浸泡在抗体稀释液里面
3 回答
4241 围观
问
WB 实验中二抗用 TBST 稀释液是否容易出现杂带？
我是金博士
1、稀释液可以放在4度，但是不建议超过一周2、回收的不能超过一周，如果超过一周放到-20冻存。我们都不回收的3、我们用BSA4、二抗还回收呢？我们从来不回收。为什么用TBST稀释会容易出现杂带？5、胶片比膜大6、用剪刀剪
1 回答
8009 围观
问
WB总是做不出理想的条带肿么破？
飞天幻雪
做不出理想的条带是什么意思呀？内参不齐？没有目的条带？杂带太多？还是做出的趋势和实验预期不符合？？
3 回答
531 围观
问
WB 的试剂准备应该自己配制还是买试剂盒？能给点建议吗？
momimimimomi
做WB实验比较花钱的是一抗，国外进口的1支大概在3000元-5000元之间不等（根据你的指标而定），二抗价格相对便宜很多，如果使用荧光二抗的话，1瓶Dylight 2000元的可以使很久。剩下的试剂均可以单独购买，Marker、蛋白酶抑制剂、磷酸化蛋白抑制剂最好买进口的，价格可能在1000元-3000元左右（根据公司、规格），剩下买国产的即可，如裂解液、电泳液、电转液、Tris-Hcl、SDS-P
2 回答
1641 围观
问
WB转膜10KD的蛋白电转条件？
医往情深丁香园
我们湿转时转膜液中一般都是不加SDS的,而甲醇是必须加的,量通常在100-200ml,我们在做12KDa时甲醇150ml,条带ok,转膜液中改加甲醇试试吧。
18 回答
3561 围观
问
WB 结果的内参非常好，既没有背景条带也亮，而目的就不行，不是没有条带就是背景很高，这又是什么原因呀？
我是金博士
1、任何一个公司的抗体都不是百分之一百的。我认为CST的抗体成功率是目前最高的2、表达量的多少可以看看文献3、CST说明书用的是什么细胞作为抗原呢？如果你手上有可以做个验证。看是否你做的细胞表达少
1 回答
2024 围观
问
WB 条带缺失？还是杂带多余？
2387 围观
问
为什么 WB 实验的目的蛋白发的很慢，而且不太清楚？
我是金博士
1、发光慢，可以考虑换用Millipore的ECL2、15孔上样量有限制，大了会串孔
1 回答
1140 围观
问
请问做泛乙酰化 WB 有哪些需要注意的地方？
dxy_74nqjka4
你好 泛乙酰化是体外检测某个酶是否具有乙酰化活性的方法吗?
1 回答
1546 围观
问
有人跑过hes5，light的wb吗？跑了结果不理想，有什么条件跑wb供参考吗。提这2种蛋白有特殊的吗？
bamboopiggy
你所谓的结果不理想是条带不清楚还是没有？条带不清楚，可以尝试增加抗体浓度或上样量，没有条带可以尝试跑全膜
2 回答
332 围观
问
细胞水平要做WB，多少细胞提的蛋白够做WB？跟细胞类型有关吗？
whilt-shirt
基本上10^6细胞就够了，可以再多一点
5 回答
4535 围观
问
单个目的蛋白抗体显影后出现两个条带一般是什么问题？
dxy_gwrp7ndq
1.非特异性的分子量偏大条带之一可能是目的蛋白在SDS PAGE出的问题出了问题，另外两个带可能本来就是杂带了。可以回收后对条带用质谱检测精确的分子量加以确定。2.非特异性的分子量偏大条带至少应该有杂带，杂带出现而且与一抗相互作用，那么只能说杂带的顺序表位也能被一抗识别，必须更换专一性更高的抗体。3.还有考虑你的镍柱亲和分离的问题，是不是获得了你的需要的目的蛋白质。
3 回答
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