WB结果出现目的蛋白很浅，但actin位点或者Gapdh位点出现很深的条带，什么原因呢

有可能内参荧光太强会遮盖目的荧光

可能有以下原因：

抗体效应：可能是由于目的蛋白的抗体效应不好，导致信号较弱。另外，由于抗体的特异性，不同的抗体对于不同的目的蛋白有不同的敏感性，也可能导致不同目的蛋白信号的差异。

表达量问题：不同蛋白在细胞中的表达量不同，如果目的蛋白的表达量较低，可能会导致信号较弱。

饱和度问题：如果目的蛋白的表达量过高，可能会导致抗体的饱和度过高，从而导致信号饱和，不能很好地检测出目的蛋白。

针对这些问题，可以考虑以下解决方案：

对于抗体效应问题，可以尝试更换其他的抗体或者优化抗体染色的条件。

对于表达量问题，可以尝试优化细胞培养条件或者提高蛋白表达的浓度，从而增加目的蛋白的表达量。

对于饱和度问题，可以尝试调整抗体染色的浓度或者时间，从而控制饱和度。

我之前也这样 然后换了膜的密度 从0.22换成0.45了 封闭时间延长到1h 洗膜时间也延长到30min 膜激活了1分半  效果就好多了

非目的条带位置的条带太亮是会影响目的条带的亮度的，建议先敷目的条带，再敷内参