WB最近遇到了好多问题，求帮助！

是阿辰呀

2023-04-13

最近检测的35kd和15kd两个蛋白总是出问题，下面那个是γ-H2AX，最近老出现这种哑铃型的条带，以及两边黑或者一边黑灰度不均匀的情况，ECL显色用不同的时间试过了应该不是ECL显影的问题，大佬们有没有知道是跑胶还是转膜还是样品制备导致的呀？

还有就是最近的胶总是越往下越窄，而且小蛋白很糊。求大佬们提一下宝贵意见

实验条件

上样：30ug，10%胶，电泳80V20min-100V1h，转膜300mA 2h，检测的是15-100kd蛋白。

问题：

1、条带灰度值不均匀，两边或者一边黑

2、条带逐渐变窄

3、15kD和35KD条带变糊

感谢感谢！！

z流沙z

2023-04-14

有帮助

1、配胶要充分混匀，没有杂质，样品要离心取上清，不要混有颗粒状物质或者细胞沉淀。

2-3、小分子蛋白可以配高浓度如15%的胶，减少电泳和转膜时间，比如电泳80v 30min和120v 至分开即可，像你蛋白这么小的转膜200mA 1h完全足够

loveliufudan

2023-04-13

有帮助

对于问题1，可能是由于样品制备不均匀或者电泳条件不合适导致的。建议检查样品的质量和浓度，并且可以尝试优化电泳条件。

对于问题2，可能是由于电泳时间过长或者电极缓冲液不足导致的。建议缩短电泳时间或者加大电极缓冲液的用量。

对于问题3，可能是由于转膜时间过长或者膜的质量不好导致的。建议优化转膜条件和膜的选择。

另外，可以尝试增加样品的加载量和使用更高分辨率的凝胶来提高检测效果。同时，注意保证实验的重复性和稳定性，以便准确地验证实验结果。

土井挞克树

2023-04-13

有帮助

出现哑铃最大的可能是胶没有配置好，胶凝固后不均一，建议重新配胶。