WB 条带缺失？还是杂带多余？

老师布置的作业，从来没有接触过 western blot，就讲了一节课一点思路也没有，自己有查相关资料。ERK 是 1 和 2 两条条带 44kD和 42kD，图中总的ERK只有一条，所以问题是不是出在这里；或者说 ERK1 和2分子量太近这个胶浓度的原因没有分离出来，然后 p–ERK 那里有一条杂带？ (另外想问一下①总的ERK包括不包括p–ERK？包括的话总的颜色是不是应该更深一点②总的ERK和p–ERK的分子量一样吗，一样的话放在同一张膜上跑是不是要每种加两次样本？) 想到这里已经头很大了，至于什么原因更不知道了，请各位大佬教教。