做 200kd 以上蛋白的 Western Blot 时注意事项？

用8%的胶，甚至可以用6%的胶，转膜时间要相对延长，买分子量差不多的marker，看转膜是否转过去了。

跑胶：分离胶用６％，如果要同时做内参切两快胶可以用　８％，只要根据marker把目的蛋白切进去就可以．
转膜：大分子建议湿转效果比较好，条件可能根据仪器不同而有所不同，半干转也可以，条件也相对比较容易控制，恒流１．５－２mA/cm2,转２．５小时．对于大分子蛋白转膜液中最好加入ＳＤＳ．

1）做200kd蛋白的WB时要注意，分离胶最好选择>7%的；剥胶时要小心；

2）转移时间需要相应延长；要做分子量参照（否则出现杂带不知道如何分析）；

3）转膜液中甲醇含量可适当降低，推荐使用湿装转膜效率更高！