用克隆化基因在体外合成的蛋白质分析 DNA-蛋白质相互作用

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

体外合成的蛋白质对于测定一个克隆的基因是否编码一个特异的DNA结合蛋白，以及分析DNA-蛋白质相互作用都是极为有用的。为了检测DNA的结合能力，可将标记的蛋白质与特异的DNA片段共温育，用非变性丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质-DNA复合物与游离的蛋白质分离开来。来源：《精编分子生物学实验指南》第五版

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1) 用合适的限制性内切核酸酶切割0.5μg含有结合位点的质粒DNA (假设一个5 kb 的质粒），产生一个长为150〜700 bp的片段，这个片段的大小和内切酶切出的其他片段的大小不同。用酚抽提及乙醇沉淀纯化。2) 建立以下15μL的结合反应：5μL H2O3μL5×结合缓冲液5μL DNA (DNA 片段各 9 nmol/L)1μL 10 mg/mL poly (dl-dC) . poly (