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WB 实验中二抗用 TBST 稀释液是否容易出现杂带?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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pppeachya

1.我做 WB 的目的蛋白 MTSS1 说明书(CST的)中写道“For western blots, incubate membrane with diluted antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween-20 at 4°C with gentle shaking, overnight”,我在第一次稀释抗体的时候配了 100mL 稀释液(100mL 1×TBS+5g BSA+100ul Tween-20),放在 4 度冰箱,那以后在稀释抗体的时候能否用这个稀释液啊?倒了太可惜了。我是 7 月底配的,用这个稀释液会影响一抗孵育效果吗?2.我每次实验要用一抗(1:1000)好几毫升,所以是回收使用的,放 4 度冰箱的,到什么程度就不能再用了要用新的啊?3.封闭和一抗都是用 3% BSA-TBST,BSA 和牛奶有何区别啊?我一直用的是 5% milk-TBST封闭的,如果也改用 BSA 室温封闭 1h,是不是杂带就会少很多啊?4.二抗用 TBST 稀释是否容易出现杂带?如果加了牛奶那二抗就不能回收了吧?
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1 个回答

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我是金博士

有帮助
1、稀释液可以放在4度,但是不建议超过一周2、回收的不能超过一周,如果超过一周放到-20冻存。我们都不回收的3、我们用BSA4、二抗还回收呢?我们从来不回收。为什么用TBST稀释会容易出现杂带?5、胶片比膜大6、用剪刀剪
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