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Realtime（qPCR）实验进阶
Realtime（qPCR）实验进阶
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实验方法
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问
肠道菌群清理后用什么方法检测清理效果呢？若qPCR则用什么作为内参呢？
dxyc42u
我们用的是16s作为qpcr内参的
3 回答
632 围观
问
求助！！！！！ 如何用qPCR数据做信号通路筛选的分析？
精通小明术
使用qPCR数据进行信号通路筛选的分析，可以采用以下步骤：收集实验数据并处理数据：通过qPCR技术检测一组兴趣基因在不同条件下（例如，对照组和实验组）的表达水平。将数据导入到适当的统计软件中，例如R或Python，并进行标准化和规范化处理。确定差异表达基因：使用适当的统计方法（例如t-test或方差分析），确定哪些基因在对照组和实验组之间具有显著差异表达水平。这些差异表达基因可能是信号通路相关基因
4 回答
588 围观
问
请问大家CHIP-qPCR的结果怎样判定为阳性啊？下面是我的各组的CT值，这样算是阳性吗?
bamboopiggy
你首先要看你melt curve对不对，然后再对比ct值。比的是binding site和non-binding site
3 回答
1121 围观
问
染料法qPCR 为什么扩增曲线到达平台期后会出现下降？会影响结果吗？
whilt-shirt
有可能是模板和引物浓度太高导致的，这种情况会使基因表达偏低
3 回答
1066 围观
问
多糖促进肿瘤细胞凋亡，qpcr细胞周期趋势为逆的
z流沙z
可以考虑换一个内参试试，比如actin，GAPDH可能不适合于细胞周期实验
3 回答
255 围观
问
在做实时荧光定量PCR中的基因分型，在扩增体系中加入石蜡油和甘油有什么样的好处？
天一湖医者
石蜡油，甘油具有良好的渗透能力，可以进入细胞内部和胞内大分子形成氢键以取代干燥脱除的水分，从而维持蛋白质、碳水化合物及脂肪等大分子活性物质的原有结构。此外，还可以起到降低细胞脱水皱缩和缓解复水肿胀的效果。另外醇和糖类相似均具有醇和糖类羟基官能团，均能产生“优先水化作用”以及改变体系的玻璃态转变温度等，故在发挥保护效果方面和糖类具有一定共性。须知蛋白在使用时候存在冻融情况下建议可以选甘露醇、右旋糖酐
5 回答
1033 围观
问
qpcr实验每次平行的扩增曲线都相差很大，怎么解决？
bamboopiggy
1.保证样品融化完全，混匀，且用同一个白枪尖上样。2.保证qpcr mix和引物及水混匀良好。3.复孔之间上样后，高度一致，4.盖好膜，扩增完成后，复孔的高度还要一致，没有蒸发
4 回答
1267 围观
问
Qpcr实验中遇到的问题
bamboopiggy
把variation太大的孔删除掉，不能用。加样尽量用好一点的枪和枪尖，同一个样品，可以用同一个枪尖加。
4 回答
402 围观
问
qPCR平台期时，曲线呈现锯齿状，模板是质粒
bamboopiggy
可能是机器需要校正了，叫工程师来校一下
4 回答
617 围观
问
请问qPCR引物合成出来大概多久内要用完？怎么样验证一下我放了很久的qPCR引物是否还可以用？
天一湖医者
如果放入-20度的话，可以一年。
5 回答
653 围观
问
qPCR产物跑胶电泳条带弥散，条带大小为一百多bp，尝试更换qPCR的条件以及电泳条件，结果依然如故，不知道什么原因
琴妞313
可能是引物浓度不对，建议重新定引物
6 回答
971 围观
问
同一批MIX，同一条件，同一批PCR，同一块胶，同一电泳，为什么差别就这么大呢
wisdyadong
胶配的不均匀！
8 回答
3142 围观
问
PCR 实验中 dNTP 加过量会有什么影响？
我是金博士
dNTP可以与Mg2+结合，从而降低体系中Mg2+浓度，造成Taq的聚合活性下降。另一方面， dNTP过量，可以增大错误扩增的几率，导致出现非特异扩增产物和smear。
1 回答
2966 围观
问
mg2+浓度是如何影响PCR扩增效率的?
我是金博士
PCR要用到聚合酶，酶的反应需要镁离子催化。
2 回答
2058 围观
问
mRNA 的 realtime PCR 怎么操作？引物怎么加？
王建勇
就是逆转录的时候要用特异性RT引物，其他的合普通的realtimePCR一样的。
1 回答
824 围观
问
PCR 的异常条带是为什么？
我是金博士
你是按文献的引物P的吗？首先PCR设计引物也不是太难，完全可以自己做；其次很多文献上的引物甚至基因不一定是对的，还是要根据NCBI里面的来；最后针对您的情况，可以再优化下条件PCR，还是不行的话，不要纠结，重新设计引物吧，这样快一点。
1 回答
1857 围观
问
real-time PCR 与 reverse-transcription PCR 有什么区别？
woodeygao
reverse-transcriptionPCR是把提取的RNA逆转录成为cDNA，RNA——cDNA，靠的是逆转录酶；RT-qPCR，Real-Time定量PCR，是用来扩增DNA，和普通PCR方法不同是加入了荧光染料（楼上说的SYBR只是一种），通过检测器检测到荧光信号变化来对扩增的DNA进行定量，DNA-DNA，靠的是DNA合成酶和DNA外切酶。简单来说reverse-transcripti
5 回答
12605 围观
问
PCR 和原位 PCR 在概念上有什么区别？
phhcrab
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值。简单的说原位PCR的样品要像类似于组织切片那样先做下
1 回答
972 围观
问
RNA提取，rtPCR和qPCR碰到的问题
wangqing2020
取完一个标本后，趁研钵还是很冷的状态下，向研钵中加一勺（用不锈钢的小汤勺即可）液氮，立刻用研棒搅动样品，趁样品飘在液氮中，将样品和液氮一起倒到锡箔纸做成的小碗中（用来收集废样，便于丢弃）。如果一次洗不干净，可以多洗两遍，我都是这样做的，一般洗两次就很干净了。
2 回答
1534 围观
问
做荧光定量PCR和半定量PCR有什么区别？半定量的PCR退火温度和荧光定量PCR是一样的吗？
迟C迟
荧光定量PCR和半定量RT-PCR都可以用来检测基因的表达量的，但二者检测的东西多少有些不同。荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入可以和双链DNA特异性结合的荧光染料（SYBR green）或者和目的DNA片段结合的荧光探针（taqman)，通过监控PCR过程中的荧光的变化，并且和某些管家基因的荧光变化进行对比反应出目标基因的表达量。荧光定量PCR的主要有效数据是荧光信号增长到最大值的一半时的时
3 回答
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