相关实验:原代肿瘤细胞的选择性培养:汇合饲养层肿瘤细胞筛选实验
我的ok绷
最近提取了一批多糖浓度逐渐增高的肿瘤细胞rna跑qpcr,但是做的细胞周期这一块的时候,总是跑不出趋势,就是他算出来的数据都是比对照孔高,而且越来越高!!这是为啥呢?wb倒做出来了!
z流沙z
可以考虑换一个内参试试,比如actin,GAPDH可能不适合于细胞周期实验
毛利小五郎的徒弟
可能是基因表达量低,所以qpcr检测不出来。
loveliufudan
以下几点可能会导致这种现象的出现:
RNA提取:RNA提取的质量和纯度对后续的qPCR实验非常重要。如果RNA质量不好或者纯度低,会导致qPCR的结果不准确。
反转录反应:反转录反应是从RNA到cDNA的关键步骤,反转录反应的条件和质量对后续的qPCR结果也非常重要。
实验设计:在实验设计上,你需要确定合适的内参基因,保证内参基因的表达稳定不受样品处理影响,同时合适的对照组也需要选取。如果对照组选取不合适,也可能会导致出现你描述的现象。
实验操作:在实验操作上,你需要注意反应体系的组成和反应条件的控制,如模板、引物和探针的浓度、温度、反应时间等。
数据分析:在数据分析上,你需要确认数据是否经过正确的标准化,还需要检查数据处理的正确性和统计学分析的合理性。
总之,出现这种现象的原因可能很多,你需要对整个实验的过程进行仔细的检查和排除,同时多方面考虑问题可能有助于解决这个问题。
相关产品推荐