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real-time PCR 与 reverse-transcription PCR 有什么区别?

相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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海宝贝7号

我刚开始看 PCR,书上写 real-time PCR属于脱氧核糖核酸 DNA 分析法,而 reverse-transcription PCR 属于核糖核酸 RNA 分析方法,请问两者有什么区别吗?都简称 RT-PCR? ps:我的理解是 real-time PCR 是在 reverse-transcription PCR 基础上了染料或探针,不知道这样理解对吗?
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5 个回答

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dxy_test_seller1

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为什么reno晨说的RT-qPCR我完全木有听过?
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金颖莉胖胖胖

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reverse-transcription PCR 是逆转录PCR;Real-Time PCR是实时荧光定量pcr,前者底物是rna,后者底物是dna或者cdna
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擱淺海豚

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不知道是我一直没理解对?为什么reno晨说的RT-qPCR我完全木有听过?我只知道。。。PCR是普通DNA增值。qPCR (quantitative PCR)就是定量PCR,也叫Real-Time PCR,(我以前一直把RT当做 Real Time简称)指根据荧光标记每个cycle的荧光强度来测定样品中目标DNA的量,也因为本来不可视的DNA amplification cycle被荧光标记(probe)后可测定了可视了,所以叫做real time (即时可视)。RT 就是reverse transcription,就是RNA (包括mRNA,miRNA都是可以根据不同的primer选定来分别检测的)先被逆转录成单链cDNA(指转一次,所以转出来的量的多少等于mRNA量),然后用cDNA继续PCR,只不过这个PCR结合了荧光(probe)的标记,所以可以定量。定出来的量就是RNA表达量,合起来就是RT-qPCR。简单归纳就是PCR带RT的就是测定RNA,不带的就是DNA,带q的就是可定量,所以相对应就是 RT-PCR(RNA增值),
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woodeygao

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reverse-transcriptionPCR是把提取的RNA逆转录成为cDNA,RNA——cDNA,靠的是逆转录酶;RT-qPCR,Real-Time定量PCR,是用来扩增DNA,和普通PCR方法不同是加入了荧光染料(楼上说的SYBR只是一种),通过检测器检测到荧光信号变化来对扩增的DNA进行定量,DNA-DNA,靠的是DNA合成酶和DNA外切酶。简单来说reverse-transcriptionPCR是将不太好定量的RNA转化为DNA,RT-qPCR则是对DNA进行直接定量。
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reno晨

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reverse-transcription PCR 是逆转录PCR,是指你提取的mRNA逆转成cDNA的过程。也是一般细胞实验中做RT-qPCR的第一步。RT-qPCR就是指以DNA(cDNA或者基因组DNA)为模板SYBR染料检测的实时荧光定量PCR,用来看mRNA的表达含量等。当然现在很多试剂盒,逆转PCR和RT-qPCR可以一起完成。
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