常用细胞染色实验

1c)将1μL的染色混合液放至12 mm×75 mm的玻璃试管的底部。加入25μL细胞悬浮液，用手腕轻柔地混合。2c)将10μL的该混合液放在一干净的显微镜载玻片上，盖上22 mm2的盖玻片。用一 落射光显微镜的40×到60×的干物镜和一适合观察荧光素的滤光片结合起来检查。3c)计数至少200个细胞，记录以下四个细胞状态的每一个数值：①有正常核的活细胞 (VN；有结构的亮绿色染色质）；②有凋亡核的

细胞在整个生命过程中进行着多种生命活动，它们都是通过细胞中各种固有的结构及其成分来实现的，真实地反映这些结构和成分在不同细胞中的特点对了解细胞生命过程具有重要意义。活体染色即是一种能够反映细胞活性状态下特征的方法，它是利用某些无毒或毒性较小的染色剂使细胞内某些结构或组分以天然状态显示出来的一种染色方法。

各种细胞操作，包括传代、冻存和原代组织的分离，均能导致细胞死亡。为了确定群体细胞中的存活细胞数，可采用台盼蓝染料排斥实验（Phillips 1973)。正常的健康细胞能排斥染料，但细胞膜完整性丧失后台盼蓝可弥散入细胞内。染料排斥实验是一种粗糙的估计细胞活力的方法，无法区别 10%~20% 的活力差异。除此之外，排斥染料的细胞有可能不贴壁或不能较长时问生存或繁殖。

瑞氏染料中有美蓝和伊红两种成分，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调。血细胞核由去氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等形成核蛋白。这种强碱性的物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力，所以染成红色；核蛋白中还有少量的 弱酸性蛋白，它们又与染液中的碱性染料美蓝起作用而染成蓝色，但含量太少，蓝色反应极弱 ，故核染色呈现紫红色。较幼稚的细胞之胞浆和细胞核之核

β-半乳糖苷酶是一种常用的报告基因分子，通过原位染色，在普通的光学显微镜下就可以用于检测到β-半乳糖苷酶的表达。

吉姆萨（Giemsa）是一种复合染料，含天青 II 和伊红，适于血涂片、体外培养细胞和染色体等的染色。

Jurkat 细胞系作为实验室常用的人类 T 细胞白血病细胞系，通常用于研究免疫生物学和癌症生物学相关的问题，而流式细胞术很适合检测 T 细胞的信号水平。本方法以 TCR 的刺激后检测 pERK 水平为例。

荧光染料CFSE，也称CFDA SE（5,6-carboxyflu- orescein diacetate，succinimidylester）即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料。CFSE一旦进入细胞后不能从细胞中释出，也不会被代谢降解，细胞中CFSE含量减少的唯一途径是通过细胞增殖分裂。当细胞分裂时，CFSE标记物可平均地分配到两个子代细胞中。因此其荧光强度是亲代细胞

Treg 细胞染色技术是指先对细胞进行固定、破膜处理后，通过鉴定细胞因子特异性染色的荧光信号，分选和鉴定 Treg 细胞。

胶原纤维是由胶原蛋白聚合与缠绕嫘旋排列而成的，具有双折光性，经过特殊染色后，能够在偏光显微镜下观察到四种不同型的胶原纤维。由于胶原纤维分子中含有碱性氨基酸，能够与酸性染料进行结合反应。常用丽春红-苦味酸（2，4，6-三硝基苯酚）染色法。

Hoechst 是一种可以穿透细胞膜的膜通透性荧光染料，在嵌入双链 DNA 后释放蓝色荧光，故正常细胞和中早期凋亡细胞均可被 Hoechst 着色。Hoechst 33258 和 Hoechst 33342 均为非嵌人性荧光染料，Hoechst 33258 常用于细胞凋亡检测，多用于活细胞染色。Hoechst 33342 活细胞和死细胞均可，Hoechst 33342 能透过胞膜完整的细胞嵌入细胞

用于脑石蜡或冷冻切片上尼氏小体（Nissl body）染色。Nissl 染色是以德国神经病理学家 Franz Nissl 的名字命名的。Nissl 染色液染色后尼氏小体呈蓝紫色，常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。Nissl 小体大而数量多，说明神经细胞合成蛋白质的功能较强；相反在神经细胞受到损伤时，Nissl 小体的数量会减少甚至消失。

Hoechst 是一种可以穿透细胞膜的膜通透性荧光染料，在嵌入双链 DNA 后释放蓝色荧光，故正常细胞和中早期凋亡细胞均可被 Hoechst 着色，正常细胞核 Hoechst 染色的形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒，而凋亡细胞的细胞核由于浓集而呈亮蓝色，或核呈分叶，碎片状。Hoechst 33258 常用于细胞凋亡检测，多用干活细胞染色，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst

苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度，如果染料与含有脂类的试样接触，便有大量染料进入脂类物质的结构内，使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。也可用四氧化锇染色，脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。

荧光显微镜观察1．收集细胞，PBS 洗涤细胞一次，2000 rpm 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细胞，调整细胞浓度约为 106 个/ml；2．取 100 μl 细胞悬液，加入 2-10 μl PI 染液，轻轻混匀；3．4℃ 避光放置 5 min 后，滴加于载玻片上，加盖玻片；4．荧光显微镜检测。 流式检测：1．收集细胞，PBS 洗涤细胞一次，2000 rpm 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细

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骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素（细胞外铁）和幼稚红细胞的铁粒（细胞内铁）在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁，即普鲁士蓝反应．

肥大细胞形态较大（20～30 μm），细胞核较小，细胞质内充满许多的圆形嗜碱性颗粒。由于颗粒中含有肝素等成分的多硫酸脂，也属于硫酸黏多糖类，能够被异染性染料着色，常用甲苯胺蓝染色法。

1. 固定1) 冷甲醇、丙酮固定样品 1-10 分钟，或含 3-4% 多聚甲醛 pH 7.4 的 PBS 室温固定 15 分钟。2) 冷 PBS 冲洗样品 2 次。2. 通透1) 将样品在含 0.25% Triton X-100 (或 100 μM 洋地黄皂苷或 0.5% 皂角苷)的 PBS 中孵育 10 分钟。Triton X-100 是最常用的去污剂，能增强抗体的穿透力。因为它对细胞膜有损坏作

1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮，1000 g 离心 5 分钟，弃上清。 2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次，计数细胞总数，记在管山。 3. 用约 500 μl 的 PBS 重悬细胞。 4. 加 5 ml 冷乙醇，4℃ 固定过夜。 5. 取 5X106 细胞放入 15 ml 锥形管中，1000 g 离心，弃乙醇。 6. 悬搅沉淀，用