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吉姆萨染色法检测细胞凋亡

相关实验:基于形态学检测细胞凋亡

别名:Giemsa

最新修订时间:

简介

吉姆萨(Giemsa)是一种复合染料,含天青 II 和伊红,适于血涂片、体外培养细胞和染色体等的染色。

原理

吉姆萨染色法检测细胞凋亡的基本原理是吉姆萨含天青 II 和伊红,适于血涂片、体外培养细胞和染色体等的染色。

材料与仪器

器材:

染色缸、载玻片(预先经多聚赖氨酸或其他贴片剂处理)、盖玻片、计数板、10 ml 吸管、吸管橡皮球、15 ml 离心管、微量移液器吸头、细胞涂片离心机、超净台、37 ℃ CO2 孵箱、相差倒置显微镜、普通显微镜、100 μl 微量移液器、HeLa 细胞(或别的细胞)。

试剂:

① 凋亡诱导剂(根据情况自定)
② 固定液(4% 甲醛,或多聚甲醛)

③ 磷酸缓冲液(PBS)

(M/15 酸氢二钠 49.6 ml,M/15 磷酸二氢钾 50.4 ml)

④ 消化液(0.02% EDTA)
⑤ 梯度乙醇
⑥ 二甲苯
⑦ 分化液(75% 乙醇-0.5% 盐酸)
⑧ 中性树脂

⑨ 吉姆萨染液原液(吉姆萨 0.5 g,加入甘油 33 ml,研磨后加入 33 ml 甲醇,放入 37~40 ℃ 温箱中 12 h,棕色瓶保存)。

步骤

吉姆萨染色法检测细胞凋亡的基本过程可分为如下几步:

A 制备细胞涂片 步骤同基本方案 1。

B 甲醇-冰醋酸固定 10 min。充分晾干,或用吹风机吹干。

C 滴加吉姆萨稀释染液(PBS 液:吉姆萨原液 = 10:1),染色 3~10 min。

D 流水冲洗,磷酸缓冲液分色(镜下控制颜色),晾干。

E 透明 二甲苯(I)和二甲苯(II)分别 1 min。

F 中性树脂封片。

G 显微镜下观察。

注意事项

应注意,在吉姆萨染色的第二步一定要充分晾干,否则将影响染色结果。

来源:丁香实验

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