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基于形态学检测细胞凋亡

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

基于形态学检测细胞凋亡是根据凋亡细胞的形态、结构与功能的改变,建立了许多种检测细胞凋亡的方法。


目前,基于形态学检测细胞凋亡是根据凋亡细胞的方法主要有 3 种:直接观察法、苏木精-伊红染色法和 Hoechst 33258 染色法。

原理

基于形态学检测细胞凋亡的基本原理是细胞凋亡时常常表现出典型的细胞凋亡形态学特征,借助光学显微镜可以直接观察到凋亡细胞的形态及结构改变。


如果细胞经吉姆萨染色、苏木精伊红染色以及荧光素染色等更容易观察到细胞的这些凋亡特征,也可通过电子显微镜观察到凋亡细胞更为细微的形态结构变化,如细胞膜及线粒体等的变化。

来源:丁香实验团队

操作方法

苏木精-伊红染色法检测细胞凋亡

苏木精-伊红染色法检测细胞凋亡是利用嗜酸性染料一伊红(E)与细胞质蛋白成分结合,将细胞质染成红色。嗜碱性染料-苏木精(H)与染色质结合将细胞核染成蓝色,在显微镜下更容易观察到细胞凋亡的形态学特征。

吉姆萨染色法检测细胞凋亡

吉姆萨(Giemsa)是一种复合染料,含天青 II 和伊红,适于血涂片、体外培养细胞和染色体等的染色。

Hoechst 33258 染色法检测细胞凋亡

Hoechst 33258 染色法检测细胞凋亡是根据凋亡细胞和活细胞 Hoechst 33258 染色后被激发光激发后发出荧光不同的细胞凋亡检测方法。

吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色法检测细胞凋亡

吖啶橙(acridine orange,AO)能同时与 DNA 和 RNA 结合,对活细胞和死细胞均能染色。溴化乙锭(ethidium bromise,EB)插入双链核酸,对失去膜完整性的细胞染色。

电镜观察法检测细胞凋亡

凋亡细胞除染色质发生变化外,其亚细胞结构也出现相应的变化,如核破裂,形成电子密度增强的膜包体;细胞膜芽生出泡,凋亡小体形成等。这些变化在分辨率较高的电子显微镜下能很好显示。此外,透射电子显微镜样品的固定、脱水及切片厚度均与光镜不同。

直接观察法检测细胞凋亡

直接观察法检测细胞凋亡是借助光学显微镜直接观察凋亡细胞的形态及结构改变的方法。

hoechst 染色(贴壁细胞)

Hoechst 是一种可以穿透细胞膜的膜通透性荧光染料,在嵌入双链 DNA 后释放蓝色荧光,故正常细胞和中早期凋亡细胞均可被 Hoechst 着色。Hoechst 33258 和 Hoechst 33342 均为非嵌人性荧光染料,Hoechst 33258 常用于细胞凋亡检测,多用于活细胞染色。Hoechst 33342 活细胞和死细胞均可,Hoechst 33342 能透过胞膜完整的细胞嵌入细胞

🔥 hoechst 染色(悬浮细胞)

Hoechst 是一种可以穿透细胞膜的膜通透性荧光染料,在嵌入双链 DNA 后释放蓝色荧光,故正常细胞和中早期凋亡细胞均可被 Hoechst 着色,正常细胞核 Hoechst 染色的形态呈圆形,淡蓝色,内有较深的蓝色颗粒,而凋亡细胞的细胞核由于浓集而呈亮蓝色,或核呈分叶,碎片状。Hoechst 33258 常用于细胞凋亡检测,多用干活细胞染色,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst

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