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Hoechst 33258 染色法检测细胞凋亡

相关实验:基于形态学检测细胞凋亡

最新修订时间:

简介

Hoechst 33258 染色法检测细胞凋亡是根据凋亡细胞和活细胞 Hoechst 33258 染色后被激发光激发后发出荧光不同的细胞凋亡检测方法。

材料与仪器

试剂:

① 含 10%FBS 的 RPMI 1640 培养液;

② 放线菌素 D(dactinomycin D)。

③ 20 μg/ml 1 Hoechst 33258 PBS 溶液。


步骤

Hoechst 33258 染色法检测细胞凋亡的基本过程可分为如下几步,本方法以检测 K562 细胞凋亡为例介绍 Hoechst 33258 染色法检测细胞凋亡:

A. 实验分组 凋亡组:收集培养的 K562 细胞,调细胞密度为 1x106/ml。于 24 孔培养板中加 K562 细胞液 1 ml,加入放线菌素 D,加 10% FBS 的 RPMI 1640 培养液,放线菌素 D 终浓度为 10 μg/ml,总体积 2 ml。于 37℃、5% CO2 细胞培养箱培养。阴性对照组,培养液不加放线菌素 D。

B. 细胞置 CO2 培养箱中培养 8 小时。在倒置显微镜下直接观察细胞凋亡情况。细胞凋亡后,收集细胞,以 800 g 离心 10 分钟,弃上清,余液重新悬浮后涂片,室温晾干。甲醇固定 1 分钟,晾干。

C. 细胞涂片用 PBS 浸泡 3 分钟,滴加 Hoechst 33258 染液 3 滴,室温避光染色 10 分钟,用水洗涤 3 次,每次 3 分钟。最后用 50% 甘油封片,在荧光显微镜下观察细胞形态变化并拍照。


注意事项

1. Hoechst 33258 为荧光染料,易淬灭。染色及洗涤过程应尽量避光。在显微镜下观察时应尽量缩短观察时间。

2. 如果有条件,可以在封片剂中加抗荧光淬灭剂以延长荧光显示时间。


来源:丁香实验

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