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直接观察法检测细胞凋亡

相关实验:基于形态学检测细胞凋亡

最新修订时间:

简介

直接观察法检测细胞凋亡是借助光学显微镜直接观察凋亡细胞的形态及结构改变的方法


材料与仪器

器材:CO2 培养箱、生物安全柜、倒置显微镜或正视显微镜。


试剂:


① 交联重组人可溶性 TRAIL(rhTRAIL);


② 含 10% FBS 的 RPMI 1640 培养液 ;


步骤

直接观察法检测细胞凋亡的基本过程可分为如下几步:


A.收集培养的 Jurkat 细胞,调细胞密度为 3x105/ml,备用。


B.实验分组

① 凋亡组:于 24 孔细胞培养板中加 Jurkat 细胞液 1 ml,加 rhTRAIL 溶液,补加含 10%F BS 的 RPMI 1640 培养液至总体积 2 ml,rhTRAIL 终浓度为 700ng/ml。混匀后,于 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中培养 3 小时。

② 阴性对照组:细胞培养液中不加 rhTRAIL。


C.将细胞培养板置于倒置显微镜下,直接观察细胞凋亡情况。或者收集细胞,将细胞离心浓缩后滴到载玻片上,盖上盖玻片,静置 5 分钟,在倒置显微镜或正视显微镜下观察细胞形态变化。


注意事项

1.在正常培养情况下,Jurkat 细胞受培养条件及生长状态的影响,也具有一定的自发凋亡的现象。

因此,所用细胞生长状态要良好,营养要充分。否则,自发凋亡细胞较多,影响实验结果。

如果细胞状态不太好,可在使用前低速离心去除死亡细胞、状态差的细胞及细胞碎片。


2.培养细胞的密度不要太大,否则影响在显微镜下观察。


来源:丁香实验

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