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Hoechst33258(或Hoechst33342)染色法检测细胞凋亡

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19674
Hoechst33258 (或Hoechst33342)染色法检测细胞凋亡

【材料与试剂】

Hoechst33258染液:称取Hoechst33258(或Hoechst33342)1mg,用20ml蒸馏水溶解,过滤,4℃避光保存。用时用蒸馏水10倍稀释成染色液,pH7.0。

固定液:4%多聚甲醛。

荧光显微镜。

【操作方法】

将制备好的石蜡切片按常规脱蜡、水化,用PBS洗5min;

或冰冻切片用冰丙酮固定15min,吹干,用PBS洗5min;

或细胞涂片或细胞甩片用0.1%多聚甲醛固定30min,用PBS洗5min;

将以上制备好的玻片,浸泡在装有Hoechst33258(或Hoechst33342)染液的染色缸中,避光作用10min;

封片。

【结果判断】

置于荧光显微镜下,选用340nm的激发光观察:在荧光显微镜下,活细胞呈弥散均匀荧光,凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。

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