瑞氏（wright）染色法检测细胞凋亡
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瑞氏（wright）染色法检测细胞凋亡
【材料与试剂】
Wright染液：称取Wright粉剂0.1g在碾钵内，充分碾磨，量取甲醇60ml，逐步加入，边加边碾磨，直到染料全部溶解，置试剂瓶中密封，1周后可用。
Wright磷酸盐缓冲稀释液：Wright染液10 ml，磷酸盐缓冲液20ml。
磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾6.63g，磷酸氢二钠2.56g，蒸馏水1000ml。
染色缸，离心涂片机，离心机，显微镜。
其它：甲醇，0.08%醋酸，中性树胶。
【操作方法】
收集细胞（1×106 ），PBS洗1次；
将以上细胞涂片或用离心甩片机制成细胞甩片；
用甲醇固定3～5min；
将标本玻片插入 Wright染液缸中染色2 min；
再插入Wright磷酸缓冲稀释液染色4～10min，用蒸馏水冲洗。如果颜色太深，可用0.08%醋酸分化数秒钟；
晾干，用中性树胶封片；
【结果判断】
正常细胞核染成深蓝色或蓝紫色，色泽均一，凋亡细胞可见核固缩，破碎，染色变深，细胞膜皱缩，出泡，出现凋亡小体。
（三）Giemsa（姬姆萨）染色法
【材料与试剂】
姬姆萨染色液的配制：称取姬姆萨染料0.8g，加入50ml甲醇，加温至58℃，搅拌约2h待染料彻底溶解后，缓慢加入50ml甘油，充分摇匀，置37℃温箱中保温8～12h。然后置棕色瓶中密封保存，即为姬姆萨原液，一般在12～24h后即可使用。临用时，取1ml姬姆萨原液与10ml PBS（pH7.4）混合，即为姬姆萨工作液。
甲醇和PBS（pH7.4）
离心机，离心涂片机，显微镜，染色缸。
【操作方法】
细胞悬液于1000r/min离心10min，去除上清后，将细胞重悬于PBS中，使细胞浓度为1×106 个/ml；
取50～100μl细胞悬液均匀涂布于载玻片上或用离心涂片机制片，室温晾干后用甲醇固定1min，晾干；
在细胞上滴加两滴姬姆萨染色工作液，室温染色5min，用水轻轻洗去染液，室温晾干；
【结果判断】
凋亡细胞皱缩，胞膜完整，胞浆稀少或缺乏，染成淡红色；染色质凝聚，染成深紫色；细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。
