简介
吖啶橙（acridine orange，AO）能同时与 DNA 和 RNA 结合，对活细胞和死细胞均能染色。溴化乙锭（ethidium bromise，EB）插入双链核酸，对失去膜完整性的细胞染色。
原理
吖啶橙-溴化乙锭（AO-EB）染色法检测细胞凋亡的基本原理是吖啶橙能同时与 DNA 和 RNA 结合，对活细胞和死细胞均能染色。溴化乙锭插入双链核酸，对失去膜完整性的细胞染色。
材料与仪器
器材：
载玻片、盖玻片、计数板、10 ml 吸管、吸管橡皮球、10 ml 离心管、微量移液器吸头、滴管、滴管橡皮头、计数板、相差倒置显微镜、超净台（实验前紫外照射 30 min）、离心机、37 ℃ CO2 孵箱、荧光显微镜、微量移液器、HeLa 细胞（或别的细胞）。
试剂：
① 凋亡诱导剂（根据情况自定）
② 固定液（4% 甲醛，或多聚甲醛）
③ 磷酸缓冲液（PBS）
④ 消化液（0.02% EDTA）
⑤ AO 染液
（吖啶橙 100 μg 加入 PBS 1 ml）
⑥ EB 染液
（溴化乙锭 100 μg 加入 PBS ml）
步骤
吖啶橙-溴化乙锭（AO-EB）染色法检测细胞凋亡的基本过程可分为如下几步：
A 培养细胞，诱导凋亡（在超净台进行）。
B 收集细胞 先用滴管轻轻吹打，收集已脱落的细胞至离心管。加入适量的 0.02% EDTA（3～4 ml）消化未脱壁细胞并收集至上述离心管。1000 g 离心 5 min，弃上清液（悬浮细胞直接收集）。
C PBS（37 ℃）漂洗悬浮细胞。
D 固定液（4 ℃）固定 5 min，500～1000 g 离心 5 min，弃上清液。
E 蒸馏水洗，500～1000 g 离心 5 min，弃上清液。
F 调整细胞数至（0.5～2.0）x 106 个/ml。
G 取 25 μl 悬浮细胞滴于载玻片上，加入 1 μl AO-EB（1:1）染液，轻微混合。
H 直接用盖玻片封片。
I 在装有荧光滤光片的荧光显微镜下观察。
注意事项
EB 为强诱变剂，有中度毒性。提示学生操作时应戴手套。EB 污染物及废弃液应单独存放。提示学生小心甲醛。
来源：丁香实验
