EB（Ethidium bromide，溴化乙锭）

　溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。

　　观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。

当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。

这两种情况下，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5ug/ml）时，可以检测到少至10ng的DNA条带。

　　溴化乙锭可以用来检测单链或双链核酸（DNA或RNA）。但是染料对单链核酸的亲和力相对较小，所以其荧光产率也相对较低。事实上，大多数对单链DNA或RNA染色的荧光时通过染料结合到分子内形成较短的链内螺旋产生的。

　　尽管在该染料存在的情况下，线状DNA的电泳迁移率约降低15%，因此，当需要知道DNA片段的准确大小（如DNA限制酶酶切图谱的鉴定），凝胶应该在无EB情况下电泳，电泳结束后用EB染色。染色完毕后，通常不需要脱色。但是在检测小量DNA（小于10ng）片段时，通常要将染色后的凝胶进行脱色。

一、溴化乙锭的损害

　　溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配。溴化乙锭是强诱变剂，具有高致癌性！

　　SYBR Green I 和溴化乙啶（EB）Ames 测试结果显示EB容易引起有机体突变。(Singer et al., Mutat. Res. 199, 439: 37- 47.)

溴化乙锭溶液的净化处理

　　由于溴化乙锭具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。

　　(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理：

　　①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml；

　　②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4，混匀，再加入等量的2.5mol/L HCl，混匀，置室温数小时；

　　③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。

　　(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理：

　　① 按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时；

　　② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

CTAB缓冲液（DNA提取液）

　十六烷基三甲基溴化铵 别称:西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵，鲸熔三甲基溴化铵；CTAB；CTMAB；HTAB；CTABr；阳性皂

　　英文名 Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide；Cetrimonium Bromide

　　分类 季铵盐

　　代码 A－15 CAS号 57-09-0 EINECS 登录号 200-311-3

　　分子式 C16H33(CH3)3NBr

　　分子量 364.446

　　熔点：250-237℃ 水溶性 13 g/L (20°C) 纯度(含量) ＞99%

二、物理化学性质

　　本品呈白色或浅黄色结晶体至粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水,震荡时产生大量泡沫，能与阳离子、非离子、两性表面活性剂有良好的配伍性。具有优良的渗透、柔化、乳化、抗静电、生物降解性及杀菌等性能。本品化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。

用途 本品为天然、合成橡胶、硅油和沥青乳化剂；合成纤维、天然纤维和玻璃纤维的抗静电剂、柔软剂；护发素的调理剂；相转移催化剂；乳液起泡剂、表面活性剂，分析试剂，涤纶真丝化剂，皮革加脂剂，它还用于助焊剂、焊锡膏生产里起表面活性剂作用，活性强，对亮点、虚焊、焊电饱满都有一定作用。

　　HLB值15.8,熔于热水、乙醇、三氯甲烷,易熔于异丙醇水溶液,微溶于丙酮,不溶于醚。有良好的表面活性、稳定性、杀菌性及生物降解性。在强酸及强碱中穏定,耐热、耐光。与非离子及两性离子表面活性剂有良好的配伍性,对多种油脂具较好的乳化作用.对皮肤及粘膜刺激性小,有轻微脱脂作用。

是一种阳离子去污剂，广泛用于润湿、杀菌、抗静电、去污、增溶等方面。可用作纤维高效抗静电剂。工业及油田水处理中用作杀菌灭藻剂、粘泥剥离剂。牙膏中用作口腔杀菌剂。用于香波及护发素,可使头发易于梳理、光滑、柔软。

还右用作矿物浮选剂、电镀液缓蚀剂、沥青乳化剂、硬表面清洗剂及有机合成相转移催化剂等。还具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里，在高离子强度的溶液里，CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。

因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌（包括E.coli的某些株）中制备纯化DNA 。

三、重要用途

提取DNA配方

　　CTAB为十六烷基三甲基溴化铵，

　　CTAB提取缓冲液的经典配方

　　Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏；

　　EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性；

　　NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中；

　　Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。

　　CTAB 4g

　　NaCl 16.364 g

　　1M Tris-HCl 20ml( PH8.0)

　　0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌

　　冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。

提取RNA配方

　　2% CTAB（W/V）

　　2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V）

　　100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置）

　　25mM EDTA

　　0.5g/L 亚精胺Spermidine

　　2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）

　　由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。

(责任编辑：大汉昆仑王)