Annexin法检测细胞凋亡
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法检测细胞凋亡基本与Annexin-V-FLUOS和PI双标记法相同，早期凋亡细胞因细胞膜的磷脂对称性改变而使磷脂酰丝氨酸（PS）暴露于细胞膜外，PS可特异结合标记有异硫氰酸荧光素（FITC）的连接素V（Annexin V），但细胞仍然保持其细胞膜的完整性，使荧光染料PI不能进入细胞（因为PI只能进入已经破损的细胞膜）；然而，坏死或凋亡晚期的继发性坏死细胞可同时被Annexin与PI标记，用FCM可定量分析受标记的凋亡与坏死的细胞数（见表）。
用Annexin法检测坏死细胞和凋亡细胞的特点
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正常细胞
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凋亡细胞
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坏死细胞
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Annexin-V 染色
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-
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+
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+
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PI 染色
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-
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-
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+
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[材料与试剂]
(1)Annexin V-FITC ：20mg/ml
(2)结合缓冲液： 10mmol/L Hepes/NaOH，pH 7.4，140mmol/L NaCl，2.5mmol/L CaCl2 。
[操作步骤]
(1)将培养细胞以0.1mmol/L PBS 液（pH 7.4）洗两次，溶于190ml结合缓冲液中，调整细胞浓度为1x106 /ml；
(2)加10ml 20mg/L的PI，混匀，避光室温作用10分钟；
(3)用结合缓冲液洗1次后用流式细胞仪进行分析；
[结果分析]
正常活细胞为Annexin- /PI- ，凋亡细胞为Annexin+ /PI- ，继发性怀死细胞为Annexin+ /PI+ ，而机械性损伤细胞为Annexin- /PI+ 。
