丁香实验_LOGO
登录
热门搜索
rabbit igg (hhla-a*02:01pcrhuman igg (hwbkatchem硼化学(cas熔解曲线探针法goat anti-rabbit igg (hgoat anti-mouse igg (htrizol法同时提取rna、dna、蛋白质
提问
我要登录
|免费注册
搜索到 809 条结果
专题封面
层析纯化百科宝典
专题28 内容  141 订阅
蛋白质层析纯化
层析(chromatography)也称色谱,是利用蛋白质在流动相和固定相中分配不同的原理进行蛋白质分离纯化的方法。由于蛋白质理化特性的不同(分子形状、大小、极性及亲和力等),当蛋白质溶液流经固定相时,不同的蛋白质就会以不同强度的作用力结合在固定相上,实现蛋白质的分离。目前,用于蛋白质层析纯化的方法主要有 4 种:凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析和疏水作用层析
实验概况收录 5 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章
批量层析法浓缩蛋白质实验
批量层析法简单快速,适用于对蛋白质分辨率要求不高的情况,也是浓缩蛋白质的有效手段。来源:《蛋白质技术手册》
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章
层析
一、粗制裂解物的制备在制备初始裂解物时使细菌培养容量和细胞浓度与预计的DNA含量和所用柱子对质粒DNA的结合力相适合是非常重要的。过载的柱子会使系统的性能降低。而且裂解物黏度过高,需要进行强有力的混合,会导致细菌基因组DNA的剪切和随后的质粒DNA的污染。通过层析方法制备的质粒DNA最常见的污染物是高分子质量的RNA。这种污染物通过往重悬的细胞沉淀里加人5 0 μg/ml的RNA酶A可降低。试剂同Qiagen-tip柱及包括RNA酶的5 Prime—3 Prime柱一起提供。当粗裂解物上样到柱
操作方法所属实验:质粒 DNA 的大量制备实验
层析
一、提取分离实验1.  回流提取 100 g汉防已粗粉于1000 ml圆底烧瓶中,加500 ml 95%乙醇,回流1 h,过滤,同法提取一次,合并乙醇提取液,浓缩至干,得浸膏。2.  低压柱层析 低压柱层析在低压下(0.5~3 kg/cm2,一般0.3~1.2 kg/cm2)采用颗粒直径介于经典柱层析(100~200 μm)和HPLC(~37 μm)之间的薄层层析用硅胶(或氧化铝)H或G(50~75 μm)作为填充剂的一种柱层析柱,其基本原理与HPLC相同,分离效果也介于经典柱与HPLC之间
操作方法所属实验:汉防己生物碱的提取、分离与鉴定
丁香实验推荐阅读
亲和层析

分子在纯化时若无商品化的亲和填料可供选择,也可以利用预活化填料,按照说明书介绍的流程,自行偶联生物分子到填料上,形成独有的亲和填料,来分离纯化其对应的生物分子,如酶/底物、抗原/抗体等。如需要纯化某种单抗,可以将相应的抗原偶联到预活化填料NHS activated Sepharose 4FF或CNBr activated Sepharose 4FF上,然后通过亲和层析实验,就可以实现抗体的高纯度纯化。偶联配基时,需要考虑活化基团是否与填料匹配,以及填料本身是否带有间隔臂。如果偶联的配基是蛋白质

文章资讯1502 阅读
丁香实验推荐阅读
多模式层析

复合模式层析原理 复合模式层析是一种集合多种类型的相互作用(如离子交换、疏水、氢键、嗜硫亲和等)于一种层析介质从而同时具备高选择性和高分辨率的层析技术。 图15 复合模式层析配基类型   特点 相较于传统层析模式具备更快的传质速率和更高的分辨率。 在高回收率条件下实现有效分离。 能够同时去除多种杂质,如多聚体、宿主蛋白、病毒、电荷异构体等。 适用于难以同时去除多种痕量杂质的层析需求。   层析介质 目前Cytiva共有四款复合模式层析介质: Capto™ Adhere系列可有

文章资讯4260 阅读
专题封面
蛋白质修饰
专题51 内容  172 订阅
滤胶过滤层析蛋白质的纯化实验
凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术,又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离,而不需要蛋白质的化学结合,这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外,可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤,还不能一概而论,有时纯化到某一步时适用凝胶过滤。纯化一个分子量较大的蛋白(例如:超过 100 KD), 纯化的第一步可使用凝胶过滤层析,选用适当的柱填料,可使目的蛋白出现于收集液的前面部分,而所有的小分子量蛋白质仍保
实验概况收录 1 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章
疏水作用层析法纯化蛋白质实验
疏水相互作用层析是以介质疏水基团和蛋白质疏水区域间的亲和作用为基础的。疏水力是浸在一种极性液体(如水)中的非极性物质的排斥力。胞膜蛋白都具有一个明显的疏水区域以锚定在膜上。可溶性蛋白质在外表面上可能存在疏水小区,它促进蛋白复合物的形成,也可能是疏水配基结合部位或活性部位。这些暴露的疏水区对疏水层析纯化而言足非常理想的。尽管疏水层析利用相对非持异的亲和力分离纯化蛋白质,而且不具有高分辨率,但是该法很有用。来源:《蛋白质技术手册》
实验概况收录 2 操作方法 · 3 相关文章
​批量层析
1. 在烧杯或锥形瓶中平衡树脂,不断搅拌以促进平衡;2. 倾泻掉大部分溶液,保留的溶液置要使树脂能轻松的搅拌;3. 加入样品;4. 放置 1 h,使蛋白质与树脂充分结合,中间须搅拌几次;5. 过滤树脂,注意不要使树脂脱水;6. 用原始溶液在滤器上轻柔的润洗树脂;7. 将树脂重新放入烧杯中,用离子强度大的溶液处理;8. 过滤树脂,检测洗脱液中是否含有蛋白质;9. 若有必要,用离子强度更大的溶液处理树脂,直至目的蛋白被洗出。
操作方法所属实验:批量层析法浓缩蛋白质实验
薄层层析
2 mm。点一次吹干一次。 2.将展层剂于层析缸中平衡。数分钟后,将硅胶板放入。 3.当展层剂移至距上端2~3 cm时,取出硅胶板吹干,均匀喷上显色剂,于100 ℃显色。 4.15~30 min后从烘箱取出,测量 Rf 值。
操作方法所属实验:糖的硅胶 G 薄层层析实验
丁香实验推荐阅读
凝胶过滤层析

凝胶过滤层析原理 凝胶过滤层析是根据分子大小和形状的差异进行分离的一种简单可靠的层析技术。当生物分子通过凝胶过滤填料时,分子量大的生物分子只能通过大的孔径,小分子量的生物分子会经过小的孔径,因此和大分子量的生物分子相比,小分子量的生物分子经过的路程会更长。凝胶过滤层析的全过程只用一种缓冲液即可将不同分子量的生物分子进行分离。   特点 填料主要为惰性(无反应性或吸附性)的球状疏松多孔颗粒,具有均匀的分离范围 目标分子不与介质结合,通常仅需一种缓冲液 缓冲液成分不直接影响分辨率(即峰之间的分离

文章资讯2578 阅读
丁香实验推荐阅读
离子交换层析

方式简单温和,通常采用盐离子梯度方式进行洗脱,少数情况使用pH梯度洗脱 回收率高   基本步骤 离子交换层析作为一种吸附性层析,主要步骤包括平衡、上样、清洗、洗脱和再生步骤 (图6)。离子交换层析一般在特定pH的低盐缓冲液中进行上样,经过上样和清洗之后,通过增加洗脱液中的盐浓度逐渐对不同的分子进行洗脱。 图1 离子交换层析的基本步骤 适用性 离子交换层析适用于所有类型的目标分子 (如蛋白质、核酸、多糖、疫苗、病毒等),也适用于纯化从捕获到中度纯化到精纯的所有步骤以及小试、中试、放大等所有规模。  

文章资讯1960 阅读
专题封面
蛋白质实验锦囊
专题20 内容  160 订阅
染料配基层析法纯化蛋白质实验
染料配基层析不是真正意义的亲和层析,因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质,并能导致满意地纯化蛋白质。事实上,有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的,并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。来源:《蛋白质技术手册》
实验概况收录 1 操作方法 · 2 相关问答 · 3 相关文章
没找到想要的答案,提个问题吧~专业科研天团 48 小时有问必答~去提问
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序