滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验

凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术，又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离，而不需要蛋白质的化学结合，这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外，可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。

在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤，还不能一概而论，有时纯化到某一步时适用凝胶过滤。

纯化一个分子量较大的蛋白（例如：超过 100 KD）， 纯化的第一步可使用凝胶过滤层析，选用适当的柱填料，可使目的蛋白出现于收集液的前面部分，而所有的小分子量蛋白质仍保留在柱上，这样就完成了一步纯化。如果已采用了离子交换层析部分纯化蛋白质，那么凝胶过滤是下一步的理想纯化方法，因为这两种分离方法在原理上互补。

选择窄分离范围的填料分离分子量相近的蛋白质可以得到一个较好的分离效果；而分离一个分子量未知的蛋白，则需要一个宽分离范围的填料。財于一个高纯度的蛋白质，可以用凝胶过滤层析检测它的活性形式是单体还是寡聚体。总之凝胶过滤是一个可用于蛋白质纯化任何一个阶段上的分离方法。

来源：《蛋白质技术手册》