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实时荧光定量 PCR（realtime PCR）

实时荧光定量PCR可应用于：（1）定量分析未知模板；（2）单个或多个基因表达谱分析。

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实时荧光定量 PCR-FP

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荧光定量 PCR

定量 PCR 是指以一种标准作对照，通过对 PCR 终产物的分析或 PCR 过程的监测，对 PCR 起始模板量进行定量的技术。根据原理的不同，目前主要采用的定量 PCR 方法包括极限稀释法、设立内参照物的定量 PCR、荧光定量 PCR （fluorescence quantity PCR，FQ-PCR）等。其中荧光定量 PCR 是最新发展起来的一项定量 PCR 技术。

操作方法所属实验：定量PCR技术

实时荧光定量PCR技术

实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数

操作方法所属实验：实时荧光定量 PCR（realtime PCR）

问荧光定量pcr数据

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RQ（relative quantification）是相对定量分析中的一个指标，表示目标基因表达量与参考基因表达量的比值。RQmin和RQmax是RQ的最小值和最大值，通常用于评估相对定量结果的可靠性。关于RQmin和RQmax的计算方法，通常会根据实验的具体设计和分析策略而有所不同。但一般情况下，它们是根据样品的Ct值以及参考基因的表达稳定性指标（如ACtSD）计算得出的。下面是一种计算RQmin和RQmax的方法：对每个样品，计算目标基因和参考基因的ΔCt值，即ΔCt = Ct

实验问答2 回答1798 围观

问实时荧光定量PCR反应

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两步法，三步法并没有本质区别，信号的读取都是在每一个延长结束后读取。定量PCR一开始的时候也是三步法的。两步法，是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度，而且定量PCR的产物都很短，需要的时候都短，所以两步法更方便。三步法的话，花的时间长，不利于快速实验。

实验问答2 回答854 围观

实时荧光定量 PCR 的原理及应用

聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction，PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运

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荧光定量 FAQ 专题—前期准备

充分的准备是实验成功的关键，那么，qPCR 实验需要提前做好哪些了解呢？试剂的储存条件市面上大多数 qPCR 试剂推荐 - 20 ℃ 避光长期储存。 Vazyme 的 ChamQTM 和 AceQ® 两个系列的 qPCR Master Mix，长期储存应置于 - 20 ℃ 避光，解冻后可于 4 ℃ 短暂存放；避免反复冻融。原始模版稀释倍数尽量选择 Ct 值落在 15 - 28 范围的稀释倍数作为原始模板稀释度。反应体系与次数推荐 20 μl 体系，Vazyme

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定量PCR技术

定量PCR是指以一种标准作对照，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，对PCR起始模板量进行定量的技术。根据原理的不同，目前主要采用的定量PCR方法包括极限稀释法、设立内参照物的定量PCR、荧光定量 PCR （fluorescence quantity PCR，FQ-PCR）等。其中荧光定量PCR是最新发展起来的一项定量PCR技术。

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逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR，rtpcr）

逆转录-聚合酶链反应可应用于：(1）分析基因的转录产物；（2）获取目的基因；（3）合成cDNA探针；（4）构建RNA高效转录系统。

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实时荧光定量 PCR-FP 技术

带荧光标记的寡核苷酸探针分子小，偏振光弱。当探针与 DNA 上的特异片段结合后分子量增大，偏振光增强。在 PCR 扩增时，随着引物介导的新链形成，探针从模板上解离下来，重新成为游离状态，偏振光又减弱。在每一个 PCR 循环退火阶段，探针又可与 DNA 链重新配对，偏振光增强。在此阶段检测偏振光的增值，可对其进行定量检测。而当所扩增的核酸序列中不含与探针相配对的特定 DNA 片段时，荧光探针无法与核酸序列配对，其荧光偏振值很弱。故可检测扩增核苷酸序列中是否含有目的 DNA 片段。

操作方法所属实验：实时荧光定量 PCR-FP

🔥 Real-time PCR（基本方法一）

实时荧光定量 PCR（Real-Time PCR）实验流程一、RNA 的提取不同组织样本的 RNA 提取适用不同的提取方法，在总 RNA 的提取过程中，注意避免 mRNA 的断裂；取 2 μg 进行 RNA 的甲醛变性胶电泳检测，如果存在 DNA 污染时，要用 DNase I 进行消化（因为在处理过程中 RNA 极易降解，建议体系中加入适量 RNA 酶抑制剂）。二、DNase I 消化样品 RNA 中的 DNA。三、RNA 琼脂糖凝胶电泳1. 1% 的琼脂糖凝胶电泳凝胶的配制：1）称取琼脂

操作方法所属实验：实时荧光定量 PCR（realtime PCR）

问荧光定量PCR的引物问题

实验问答2799 围观

问荧光定量 PCR 的退火温度怎么设定？怎样摸索？

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请问做退火温度梯度pcr是用引物跑普通pcr还是跑荧光定量pcr

实验问答2 回答4049 围观

要想荧光定量 PCR 结果好，这些实验设置要点需记牢

实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功

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荧光定量PCR概述

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外扩增核酸片段的基因检测技术，具有简便易行、灵敏度高等特点。传统的PCR定量是应用终点PCR来对样品中的模板量进行定量，通常用凝胶电泳分离，并用荧光染料来检测PCR反应的最终扩增产物。但是普通PCR扩增已经满足不了分子生物学的研究，荧光定量PCR（Flurogenic Quantitative Polymerase ChainReaction，QPCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，以其快速、特异性强、重复

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细胞因子检测

细胞因子 (cytokine) 是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称。在免疫应答过程中，细胞因子在免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。细胞因子及受体检测是判断机体免疫功能的一个重要指标，具有重要的实验研究价值和临床实用价值，可以作为许多疾病辅助诊断依据或用于病程观察、疗效判断等。目前，用于细胞因子的检测方法主要以下几种：酶联免疫吸附实验 (ELISA) 细胞因子的定量检测方法、固相酶联免疫斑点技术（ELISPOT）、微量样本多指标流式蛋白定量技术 (CBA

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荧光定量聚合酶链式反应检测可溶性细胞因子

荧光定量 PCR 技术, 是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过 Ct 值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。

操作方法所属实验：细胞因子检测

病毒滴度检测——腺相关病毒

腺相关病毒滴度检测采用实时荧光定量 PCR 法：滴度单位：vg/mL，指每毫升中含有的病毒基因组拷贝数1、检测步骤稀释标准品质粒，设置标准品的拷贝梯度为 105 、106 、107 、108 、109 、1010。配置 QPCR 反应体系，每个样品和标准品设计 3 个复孔，进行 QPCR 反应。2、数据分析（以 HBAAV2/9 -GFP 滴度测度为例）原始实验数据。Roche LC96 实时荧光定量 PCR 仪所测 Ct 值数据如下：标准曲线制作。以每组 AAV 标准品的Ct均值为纵坐标

操作方法所属实验：重组腺相关病毒载体的生产实验