实时荧光定量 PCR-FP

PCR 技术

最新修订时间：2023-07-23

简介

实时荧光定量 PCR-FP

原理

带荧光标记的寡核苷酸探针分子小，偏振光弱。当探针与 DNA 上的特异片段结合后分子量增大，偏振光增强。在 PCR 扩增时，随着引物介导的新链形成，探针从模板上解离下来，重新成为游离状态，偏振光又减弱。

在每一个 PCR 循环退火阶段，探针又可与 DNA 链重新配对，偏振光增强。在此阶段检测偏振光的增值，可对其进行定量检测。而当所扩增的核酸序列中不含与探针相配对的特定 DNA 片段时，荧光探针无法与核酸序列配对，其荧光偏振值很弱。故可检测扩增核苷酸序列中是否含有目的 DNA 片段。

来源：

操作方法

实时荧光定量 PCR-FP 技术

1、血清处理：在 30 μl 血清标本中加 30 μl 处理液（10 mmol/L Tris-HCl、pH 8.0 1 mmol/L EDTA、1 ml/L NP40）于离心管中煮沸 15 min，7 000 r/min 离心 5 min。吸取上清液 2 μl 作模板。2、PCR 扩增反应和液相杂交: 取 2 μl 模板加到 28 μl PCR 反应液中（10×PCR 缓冲液 3 μl，dNTPs