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实时荧光定量 PCR-FP

实验分类:

PCR 技术

最新修订时间:

简介

实时荧光定量 PCR-FP

原理

带荧光标记的寡核苷酸探针分子小,偏振光弱。当探针与 DNA 上的特异片段结合后分子量增大,偏振光增强。在 PCR 扩增时,随着引物介导的新链形成,探针从模板上解离下来,重新成为游离状态,偏振光又减弱。

在每一个 PCR 循环退火阶段,探针又可与 DNA 链重新配对,偏振光增强。在此阶段检测偏振光的增值,可对其进行定量检测。而当所扩增的核酸序列中不含与探针相配对的特定 DNA 片段时,荧光探针无法与核酸序列配对,其荧光偏振值很弱。故可检测扩增核苷酸序列中是否含有目的 DNA 片段。

来源:

操作方法

实时荧光定量 PCR-FP 技术

1、血清处理:在 30 μl 血清标本中加 30 μl 处理液(10 mmol/L Tris-HCl、pH 8.0 1 mmol/L EDTA、1 ml/L NP40)于离心管中煮沸 15 min,7 000 r/min 离心 5 min。吸取上清液 2 μl 作模板。2、PCR 扩增反应和液相杂交: 取 2 μl 模板加到 28 μl PCR 反应液中(10×PCR 缓冲液 3 μl,dNTPs

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