bdvetywz 各位战友 1想证实病毒感染小鼠后脑组织中是否存在凋亡并且要定量，有什么办法？ 2 如何做凋亡通路？需要测哪些指标，采用什么办法？ magichunter 1.免疫组化，tunnel 2.主要为western（caspase系列，bcl-2，bax，MAPKs，指标太多了） bdvetywz 主要可以测哪些指标 magichunter

检测的金标准应该是电镜结果，tunnel不应算是金标准，因为容易出现假阳性，另外现在DNA ladder基本已经不用了，因为并非所有的细胞凋亡都会出现ladder。所以我认为凋亡检测最好有电镜结果，如果没有的话可以用annexin v-pi双染进行早期凋亡和晚期凋亡的检测，然后加上western的凋亡蛋白定量表达结果（BCl-2,bcl-xl,bax,bad,caspase系列）这样做即定量，又可以区分早期和晚期凋亡，此外还有利于解释凋亡的发生机制，应该比较好。 ycdwbj

：碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测。早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA结合的荧光染料（如PI）不能时入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。 检测方法：获取11×106细胞/ml的细胞

一、细胞凋亡与细胞坏死的的区别细胞程序性死亡 概念：细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因 子刺激时，受基因调控启动的自杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，凋亡的细胞散在于正常组织细胞中，无炎症反应，不遗留瘢痕。死亡的细胞