【求助】细胞凋亡
丁香园论坛
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各位战友
1想证实病毒感染小鼠后脑组织中是否存在凋亡并且要定量，有什么办法？
2 如何做凋亡通路？需要测哪些指标，采用什么办法？
1想证实病毒感染小鼠后脑组织中是否存在凋亡并且要定量，有什么办法？
2 如何做凋亡通路？需要测哪些指标，采用什么办法？
1.免疫组化，tunnel
2.主要为western（caspase系列，bcl-2，bax，MAPKs，指标太多了）
2.主要为western（caspase系列，bcl-2，bax，MAPKs，指标太多了）
主要可以测哪些指标
先做tunel吧，看看有没有凋亡再说。
已做，存在凋亡，现在想走通路，不知该做哪些？
凋亡通路 检测指标
线粒体通路 JC-1，caspase-9
死亡受体通路 caspase-8
内质网通路 bap 31
线粒体通路 JC-1，caspase-9
死亡受体通路 caspase-8
内质网通路 bap 31
先做caspase 3，如果结果为阳性，则分别作caspase8和caspase9，如果caspase8有结果，则做死亡受体通路,如：Fas/FasL，bid等，如果caspase9有结果，则做线粒体凋亡通路如cytochrome c的转位，线粒体膜电位变化，ROS，Bcl-2/bax,Bcl-XL/Bad等等。
NF-kB跟凋亡是什么关系，如何证实？NF-kB跟IFN又是什么关系
NF-kB跟凋亡是什么关系，如何证实？NF-kB跟IFN又是什么关系
在脑中主要存在2类细胞：1类为神经元细胞，负责神经信号传递和大脑思维，信息储存等；第二类为胶质细胞，主要为神经元细胞提供营养支持和保护作用。
当外界因素刺激胶质细胞，特别是小胶质细胞激活后，会在小胶质细胞内部激活IKK的磷酸化，然后诱发IkB的磷酸化，并进而诱导NF-kB转位到细胞核内，进而诱导基因表达（如：iNOS，COX-2等），表达后的基因转录成mRNA并进而翻译成蛋白质，如iNOS和COX-2蛋白，这些蛋白的功能就是生产炎症因子等，如NO，PGE2，TNF，IL等，然后分泌到细胞外，当这些炎症因子作用于小胶质细胞临近的神经元细胞时，会引起这些相邻神经元的凋亡，这被称之为炎症性神经细胞损伤。所以NF-kB的产生部位和诱导凋亡的部位是不同的。分别存在于2类细胞中。
当外界因素刺激胶质细胞，特别是小胶质细胞激活后，会在小胶质细胞内部激活IKK的磷酸化，然后诱发IkB的磷酸化，并进而诱导NF-kB转位到细胞核内，进而诱导基因表达（如：iNOS，COX-2等），表达后的基因转录成mRNA并进而翻译成蛋白质，如iNOS和COX-2蛋白，这些蛋白的功能就是生产炎症因子等，如NO，PGE2，TNF，IL等，然后分泌到细胞外，当这些炎症因子作用于小胶质细胞临近的神经元细胞时，会引起这些相邻神经元的凋亡，这被称之为炎症性神经细胞损伤。所以NF-kB的产生部位和诱导凋亡的部位是不同的。分别存在于2类细胞中。
做凋亡相关基因表达情况检测也可以，美国Signosis有这方面的试剂，该试剂操作简单，像做ELISA酶免试验一样，它是将检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测，可定量分析。
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