细胞凋亡：流式细胞仪检测实验

1)凋亡刺激后，从培养液中沉淀所要分析的细胞，同样沉淀一未处理的对照培养液。重悬于3 ml的冰冷的FACS缓冲液，然后300 g离心5 min沉淀细胞。轻轻晃动试管以重悬沉淀。如果同时对细胞其他表面表达的Marker染色，这步应该在固定之前做。2a)如果细胞没有被其他荧光团标记的抗体染色：重悬细胞于FACS缓冲液，边涡旋振 荡边加入1倍体积的冰冷的100%乙醇，通过这样的方式固定细胞。室温孵育细胞

1a)多色分析：进行免疫荧光染色。重悬染色细胞于PBS，转移含5×105个细胞的细胞液至一 12 mm×75 mm圆底离心管。必须确保用于多色染色的荧光团没有被TUNEL步骤的固定剂破坏。FITC、PE和Texas红不受影响。Duochromes (PE和Texas红的结合物，如Red 613)也不受影响，但是别藻蓝素（APC)会被固定剂破坏。1b) TUNEL检测：转移含5 ×105的细胞液至一

1) 准备5〜8μm的冰冻切片，室温过夜晾干载玻片。石蜡切片也可以用；切片应该事先制备，水化，然后真空干燥。2) 用PAP笔在每个切片周围的玻璃上划一条疏水界线。3) 用1%多聚甲醛完全覆盖整个切片，在一个密闭的箱内室温孵育30 min。4) 倒掉多聚甲醛，洗涤载玻片在含TBS的广口瓶或含染色托盘内室温孵育5 min，在孵育过程中，载玻片从该溶液浸入、取出3〜4次。5) 用含0.1%(V/V) H