细胞凋亡检测实验
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简介
细胞凋亡检测可应用于：（1）肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究；（2）临床诊疗，新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗；（3）对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。
来源：丁香实验
操作方法
一、试剂准备 1. 三尖杉酯碱（HT）：300μg/ml； 2. Tris-HCl（pH7.5）：100mmol/L； 3. EDTA缓冲液：5mol/L； 4. 碱性裂解液：0.2mol/L NaOH； 5. 醋酸钠：3mol/L KAc（pH4.8）； 6. PI母液：500μg/ml； 7. Ho33342母液：2mmol/L； 8.
形态学检测法一、光学显微镜和倒置显微镜 1. 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。 贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 2. 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割 成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。 二、 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 一
DNA ladder法一、材料与试剂准备 1. 材料：凋亡细胞。 2. 蛋白酶K（500 μg/ml）， 醋酸钾氯仿（8 mol/L），无水乙醇，70%乙醇，2%琼脂糖凝胶。 3. 白细胞裂解液：pH8.0，10 mmol/L Tris-HCl，10 mmol/L NaCl，10 mmol/L EDTA，1% SDS。 二、操作步骤 1. 收集凋亡细胞：取1～2×106
Annexin V/PI双染色法一、试剂与仪器 1. 孵育缓冲液：10 mmol/L HEPES/NaOH，pH7.4，140 mmol/L NaCl，5 mmol/L CaCl2。 2. 标记液：将FITC- Annexin V（宝灵曼公司产品）和PI加入到孵育缓冲液中，终浓度均为1 ug/ml。 3. 流式细胞仪。 二、实验步骤 1. 细胞收集：悬浮细胞直接收集到10 m
磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）一、悬浮细胞的染色 将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5~1×106）用PBS洗2次，加入100 ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V（20 ug/ml）10 ul，室温避光30 min，再加入PI（50 ug/ml）5 ul，避光反应5 min后，加入400 ul Binding Buffer，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测（一般不超过1
TUNEL法一、试剂配制 1. 磷酸缓冲液PBS（pH7.4）：磷酸钠盐 50 mM，NaCl 200 mM。 2. 蛋白酶K（200 μg/ml，pH7.4）：蛋白酶K 0.02 g；PBS 100 ml。 3. 含2%H2O2的PBS缓冲液（pH7.4）：H2O2 2.0 ml；PBS缓冲液 98.0 ml。 4. TdT酶缓冲
Caspase-3活性检测法一、Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及对底物多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。 1. 方法 收集细胞→PBS洗涤→抽提细胞裂解液→蛋白定量→SDS-PAGE电泳→硝酸纤维素膜或PVDF膜转移→5%脱脂奶粉封闭，室温1.5~2 h或4°C过夜→C
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