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条件培养基的制备
收集对数生长晚期的同源或异源细胞系的培养基,过滤,根据需要用新鲜培养基稀释。
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关问答 · 3 相关文章
酿酒酵母培养条件实验
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。
实验概况收录 3 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章
条件性表达FLAG标记
诱导蛋白表达在悬浮细胞中往往比单层细胞中耗时更多。时间进程研究的结果表明,4 天后诱导的 FLAG 标记蛋白达到最大量,一定程度上是由于在大体积的悬浮培养基中使用便宜和低浓度的小牛血清可以减少倍增时间。每天培养基加倍使细胞处于轻微稀释的条件下,诱导效率更高。
操作方法所属实验:抗原标记蛋白复合体纯化实验
变化起始材料和洗脱条件
1. 纯化 FLAG 标记的人 pol II 全酶:1.1 建立一个 HeLa 细胞衍生的、四环素调控的、条件性表达 FLAG 标记的人 pol II 亚基的细胞系。按照「条件性表达 FLAG 标记」步骤 1~20 描述的方法制备核抽提物、细胞质 S100 和核丸。1.2 从核抽提物或 S100 中免疫亲和纯化 FLAG 标记的人 pol II 全酶,按照「组成型表达 FLAG 标记」步骤 26~34,但使用 BC100/1%(V/V)诺乃洗涤剂 P-40 作为洗涤和洗脱缓冲液。2. 纯化
操作方法所属实验:抗原标记蛋白复合体纯化实验
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PCR 不必“摸条件

PCR 是分子生物学科研人员必做的实验,为了扩增目的基因,经常要对 PCR 的体系进行“摸条件”,特别是一些 GC 含量高的目的基因或者 DNA 纯度不高的样本! “摸条件”成为 PCR 实验最费时费力的工作! 虽然市场上有很多 PCR 的 MasterMix 试剂,将酶、dNTP、反应缓冲液混合在一起,很方便客户的使用,但仅仅是简单的混合,极少公司对MIX的应用范围进行广泛的实验和优化,只能做一些不复杂的 PCR。 百泰克通过长时间、无数次的实验优化,终于推出了适用范围广、稳定性良好

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WB实战指南(六):孵育条件优化

那么如何通过改变抗体稀释液的配方,寻求抗体孵育的最佳条件呢?首先要认清,抗体稀释液没有一个绝对通用的配方;一种抗体一个脾气。其次,抗体稀释液的配方要兼顾与特异性抗体竞争抗原的强度,以及对其他区域的封闭强度两方面的平衡。目前,抗体稀释液中可以充当封闭蛋白的主要有milk,BSA和gelatin,似乎很少的样子 。。。可是,你有没有考虑过“复方”?--这下配方无限多了吧。1. 采用milk,BSA和gelatin的单方。3% milk,5% BSA,2.很多情况下单方的浓度很高了,背景问题仍不能

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利用位点特异的 DNA 重组方法诱发基因组的条件突变
通过位点特异的D N A 重组改变完整细胞和有机体的基因组已经成为一种重要的基因转移方法。基因转移和同源重组引起的D N A 修饰一旦整合进目的基因组就不会再移动。与之相反,转移的D N A 片段如果包含外源重组酶目的序列,则可以进一步修饰之前发生变化的基因组结构,从而提高了基因转移的实用性,加强了实验的设计。作者:T.弗里德曼等,译者:殷勤伟等,本实验来自「基因转移」
实验概况收录 2 操作方法 · 3 相关文章
存在干扰物质条件下的蛋白质浓度测定实验
习惯上,蛋白质的浓度通常是按 Lowry 及其合作者(Lowry 等,1951) 的方法用 Folin-Ciocalteau 试剂进行测定的。但样品中的盐或去垢剂等对这种方法有干扰。Peterson(1977) 介绍了一种改进方法,可部分地解决这些问题。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章
方案14.2 条件培养基的制备
1. 条件细胞(条件细胞:同一种细胞、其他细胞系(如,3T 3 细胞),或小鼠胚胎成纤维细胞)生长至 50 % 汇合。2. 更换培养基,继续培养 48 h 。3. 收集培养基。4. 离心,1000 g,10 min。5. 0.45 μm 无菌过滤器(除菌滤器:0.45 μm 或0.22 μm ,过滤瓶)过滤(培养基可以先经过 5 μm 和 1.2 μm 过滤器预先过滤)。6. 将条件培养基(克隆用培养基:Ham’s F12,加 10 % FBS 或适合待克隆细胞的培养基) -20°C 保存
操作方法所属实验:条件培养基的制备
各类western转膜条件
也有很大范围的调整 ,并不是非要固定于哪一个最合适,曾经做过 一张膜转,17 KD的和170 KD的,按照170 KD的条件,17 KD的转膜也很好的。蛋白来源:人非小细胞肺癌细胞系蛋白名称(可保密):保密蛋白分子量:大于250 kDWB用膜类型、孔径:millipore PVDF膜 0.45 um转膜方式(恒压、恒流):湿转,恒流0.3A。转膜时间:180min设备:“Bio-Rad ”建议:电转保持电压在70 V以上,保持低温,如果电压低过70就需要换缓冲液了。蛋白来源:白血病细胞蛋白名称(可保密
操作方法所属实验:Western Blot 的过程与优化,着重于化学发光检测
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ChIP结果不满意,可以做的实验条件优化

染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)是研究体内(划重点鸭,体内)蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。可应用于组蛋白修饰、DNA复制与损伤相关因子结合分析、干细胞调控转录因子及辅因子等基因表达机制的广泛研究。 最近有做chIP的朋友来找我们咨询: 为什么我的ChIP实验做出来, 结果就是不理想呢? 为得到理想的ChIP结果,可以做以下实验条件优化: 1、 染色

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各类western转膜条件

蛋白来源:肿瘤手术标本 蛋白名称(可保密):转录因子 蛋白分子量:33 KDa WB用膜类型、孔径:PVDF膜 转膜方式(恒压、恒流):350 mA 恒流 转膜时间:150 min 转膜设备:湿转 Bio-Rad 说明:相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白,都能成功转上,不过没有试缩短时间效果

文章资讯161082 阅读
实验条件对流式细胞术分析结果的影响
本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。
实验概况收录 10 操作方法 · 2 相关问答 · 3 相关文章
cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件下,新表达基因的鉴定方法实验
材料许多生物是疾病研究或探索使细胞和机体应对和存活于不同刺激下的分子适应机制的优良模型。 cDNA 文库的构建和随后目的基因的筛选可促使研究者发现在调节和响应某些外部特定环境压力中有重要作用,而在其他体系中可能不表达或者不存在的新基因。确定这些新基因的可读框,进一步分析其编码蛋白质的功能可以开创全新的研究领域并可以更科学地设计下一步的研究方案。作者:马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章
方案15标准条件下肽段的反相 HPLC实验
操作方法所属实验:电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
无尿素条件下用Tris缓冲液分离多肽
1.  参照“Laemmli凝胶电泳法”步骤1~4,配制并灌制分离胶。2.  参照“Laemmli凝胶电泳法”步骤5~7,配制并灌制积层胶,但在移去分离胶顶层覆盖的异丁醇 时,以2×Tris·Cl/SDS,pH8.8而不用1×Tris·Cl/SDS缓冲液来冲洗分离胶表面。 3.  参照“Laemmli凝胶电泳法”步骤8~13,制备待测样品和加样。以2×SDS电泳电极缓冲液进行电泳,对照采用多肽分子量标准混合物。4.  如“Laemmli凝胶电泳法”骤14进行电泳。 5.  参照“Laemmli
操作方法所属实验:蛋白质的单向 SDS 凝胶电泳实验
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