各类western转膜条件

互联网2013-12-06

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除了抗体原因，转膜恐怕是western blot成败的最关键因素。

园子里好多好多人在求助转膜时间，因此我们总结了一系列分子量蛋白转膜的时间，希望对大家有用。

蛋白来源：RAW264.7 总蛋白

蛋白名称（可保密）：一些转录因子

蛋白分子量：40~70 KD

WB用膜类型、孔径：0.45 NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA

转膜时间：60~90 min

PS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。

蛋白来源：内皮细胞总蛋白

蛋白名称（可保密）：occludin & AKT

蛋白分子量：65 KD & 56 KD

WB用膜类型、孔径：0.45 PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压 100 V

转膜时间：60~70 min

设备名字是“Bio-Rad mini”。

蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：65 KD & 55 KD

WB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）

转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压 12 V

转膜时间：30-40 min

设备：“Bio-Rad mini”

建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。

蛋白来源：293T细胞

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：95 KD & 35 KD

WB用膜类型、孔径：PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压 90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。

转膜时间：70 min

蛋白来源：肿瘤手术标本

蛋白名称（可保密）：转录因子

蛋白分子量：33 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流

转膜时间：150 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。

蛋白来源：成纤维细胞

蛋白名称（可保密）：smad3

蛋白分子量：54 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流

转膜时间：150 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

蛋白来源：胰腺癌细胞

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：16 KDa and 42 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压

转膜时间：90 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KD

WB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3 A。
转膜时间：90 min

设备：“Bio-Rad mini”

建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。

蛋白来源：大鼠PBMC

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：55 KD

WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜

转膜方式（恒流）：湿转
转膜时间：60-90 min

设备：“Bio-Rad mini”

建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了其它按照常规就好了其实0.22的膜一般不怕转过头以我们的经验，转膜时间、电压其实也有很大范围的调整，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过一张膜转，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的条件，17 KD的转膜也很好的。

蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：大于250 kD

WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A。
转膜时间：180min

设备：“Bio-Rad ”

建议：电转保持电压在70 V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。

蛋白来源：白血病细胞

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：28 KD

WB用膜类型、孔径：0.45的NC膜

转膜方式（恒流）：湿转，90 min，0.25 A

设备：“Bio-Rad ”

建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。

蛋白来源：肿瘤细胞

蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白

蛋白分子量：10-200 KDa

WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：120 v 恒压

转膜时间：120 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。

蛋白来源：胰腺β细胞

蛋白名称（可保密）：*****~K~Hdiv~M~2~1~0~0~0~0~0~0~0~0~0~0~0~0~Kdiv~M~2~1~0~0~0~0~0~0~0~0~0~0~0~0~0蛋白分子量：90-130 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：250 mA 恒流

转膜时间：150 min

转膜设备：湿转

蛋白来源：原核表达

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：38 KD

WB用膜类型、孔径：0.45 NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100 V

转膜时间：120 min

蛋白来源：心脏

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDa

WB用膜类型、孔径：PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：恒压

转膜时间：70 v120 min，180 min，5-6 h

转膜设备：伯乐湿转

建议改进方向（可选）：40 kDa一下，70 v ，60-90 min足够，40-70 kDa 90-120 min即可。

70-120 kDa ，70 v，120-180 min足够，120-180 kDa ，180-240 min，180 kDa以上建议6 h。

蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：53 KD

WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒压

转膜时间：80 V 100 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白

蛋白名称（可保密）：β-actin

蛋白分子量：42

WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒压

转膜时间：50 4 h

转膜设备：湿转 Bio-Rad

蛋白来源：脑组织

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KD

WB用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um

转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒流 1 mA/cm2或2 mA/cm2

转膜时间：不定

转膜设备：北京六一仪器

建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。

在预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的5分钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期）的关系并不稳定，单纯依靠时间有时会有问题。

蛋白来源：CHO cell

蛋白名称（可保密）：酶原

蛋白分子量：40 KD

WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜（Biorad）

转膜方式（恒压）：100 V，湿转，转膜时间：60 min。

设备：Tanon（上海天能）

建议：

1. 转膜液现用现配，用完倒掉。

2. 转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。

蛋白来源：Hepg2

蛋白名称（可保密）：EGFR

蛋白分子量：170kd

WB用膜类型、孔径：pvdf 0.45

转膜方式（恒压、恒流）：24V

转膜时间：2个半小时

转膜设备：伯乐半干转

蛋白来源：肝癌细胞

蛋白名称：HIF-1α

蛋白分子量：120 kD

WB用膜类型、孔径：NC膜

转膜方式（恒压）：80伏，湿转
转膜时间：150分钟

设备：“Bio-Rad mini”

建议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。经李春红染色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36 kD。

蛋白来源：心肌细胞总和膜

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：128 KD，100，60，55，43 KD

WB用膜类型、孔径：NC膜 0.2 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒压

转膜时间：70 V 200 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

建议：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V电压下，电流约154 mA。甲醇可以加到150 ml。对大分子量如200 KD转膜时间延长6-8 h。

蛋白来源：肺脏

蛋白名称（可保密）：ICAM-1

蛋白分子量：85~110 KD

WB用膜类型、孔径：0.22NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流 300 mA

转膜时间：120 min

设备名字 Bio-Rad mini

一抗用的santa cruz 1 mL包装的。比例调整到1：800做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。

蛋白来源：成纤维细胞

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：16 KDa

WB用膜类型、孔径：0.2 um PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：0.2 A恒流

转膜时间：65 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

蛋白来源：成纤维细胞

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：28 KDa

WB用膜类型、孔径：0.2 umPVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：0.25 A恒流

转膜时间：60 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

蛋白来源：人肿瘤细胞

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：80 KD

WB用膜类型、孔径：0.45 um PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：半干转移系统恒流，勿超过0.85 mA/cm²，同时转多张膜电流需累加（串联）

转膜时间：60-90 min

设备：Bio-Rad

其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，那么转移的时间就短一些，反之，则长一点；蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。

蛋白来源：人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白

蛋白名称（可保密）：**~K~Hspan~M~K~Hdiv~M~2~1~Kdiv~M~2~1~0~Kspan~M蛋白分子量：17--116 kd

WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒流 200 mA

转膜时间：3 h

转膜设备：湿转北京六一 24D mini

蛋白来源：CO COS7 293T

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：80 72 56 52 48 25 18KD

WB用膜类型、孔径：0.45 um PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：湿转 90 V 电流约为230--280 mA之间。两张膜串联叠加。

转膜时间：40 min

设备：Bio-Rad 法码西亚

蛋白来源：人肿瘤细胞

蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白

蛋白分子量：30-60 KDa

WB用膜类型、孔径：pall NC膜 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒流 0.85-1 mA/平方厘米膜

转膜时间：60-90 min

转膜设备: 北京六一半干转

建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。

蛋白来源：人肝癌肿瘤细胞

蛋白名称（可保密）：notch

蛋白分子量：60-120 KDa

WB用膜类型、孔径：pall NC膜 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒流 0.3 A

转膜时间：-20度冰柜120 min

转膜设备: 湿转 Bio-Rad

建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成10倍或5倍的母液，保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。

蛋白来源：胶质瘤细胞总蛋白和核蛋白

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：18 KDa 、36 KDa、55 KDa、98 KDa

WB用膜类型、孔径：NC膜 PALL

转膜方式（恒压、恒流）：0.35 恒流

转膜时间：60 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad mini

转缓液的配制有点讲究。如果蛋白大于一百多，一般加入SDS，时间延长结果会更好些。

由于，目前试验的蛋白就都不大，所以，我们都采用不加SDS的转缓液，跑出来的条带也很整齐、干净。

蛋白来源大肠癌205

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：92 kd，43 kd

WB用膜类型、孔径：0.45pvdf

转膜方式（恒压、恒流）：恒压

转膜时间：90 min

转膜设备：湿转，天能。

蛋白来源：大鼠脑组织

蛋白名称（可保密）：BDNF（28 KDa）、Bactin（42 KDa）、LaminB（72 KDa），以及磷酸化蛋白（保密 43 KDa）

WB用膜类型、孔径：PVDF（0.45）膜

转膜方式（恒压、恒流）：300 mA 恒流

转膜时间：60 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad Mini

转膜缓冲液：25％甲醛觉得这个浓度的甲醛可以有效降低电转的热量，而且使膜对蛋白的吸附效果较好，Marker转到膜上很鲜艳。用立春红染色效果也很好。

蛋白来源：表达产物

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：29 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：0.3 A 恒流

转膜时间：80 min

转膜设备: 湿转 Bio-Rad

蛋白来源：cell lysate, culture medium

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：15-50 kD

WB用膜类型、孔径：NC，PVDF， 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒压， semi-dry

转膜时间：about 2h is ok if the protein is small and the voltage can keep 100 V， if not increase to 3-4 h。

转膜设备： Bio-Rad

蛋白来源：肺脏、肝脏等。

蛋白名称（可保密）：actin

蛋白分子量：43 kD

WB用膜类型、孔径：NC膜PALL 0.22 um

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流 200 mA

转膜时间：45~60 min

设备名字 Bio-Rad mini

用的santa cruz 分装和整装的都可以。效价一般1：1000-1：3000左右，可稳定较长一段时间。

蛋白来源肺脏

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：19 kd,35 kd

WB用膜类型、孔径：0.2pvdf

转膜方式（恒压、恒流）：恒流250

转膜时间：150 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad mini

蛋白来源：大鼠血管

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：140 kd

WB用膜类型、孔径：0.45pvdf

转膜方式（恒压、恒流）：恒流，200 mA

转膜时间：210 min

转膜设备:湿转,北京六一

蛋白来源：心肌

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：90 kDa，70 kDa,12.6 kDa

WB用膜类型、孔径：NC

转膜方式（恒压、恒流）：恒压

转膜时间：70 v 240 min，120 min，60 min

转膜设备：伯乐湿转

蛋白来源：脑

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：16 KD 60 KD

WB用膜类型、孔径：16的用0.22的PVDF，60的用0.45的NC

转膜方式（恒压、恒流）：20 V

转膜时间：16的30 min，60的90 min

转膜设备：Bio-Rad 半干

蛋白来源：子宫内膜癌组织

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：156.8

WB用膜类型、孔径：NC膜

转膜方式（恒压、恒流）：恒流400mA

转膜时间：90 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

蛋白来源：真核表达

蛋白名称（可保密）：（多种，30个以上）

蛋白分子量：40-200 kD

WB用膜类型、孔径：PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：恒压100 V（电流在280 mA至350 mA之间）

转膜时间：60 min（M<100kD）,60-100min (100kD<M<200kD)

转膜设备：湿转

蛋白来源：大鼠肾脏

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：130 kD

WB用膜类型、孔径：0.45NC膜 PALL

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流 350 mA
转膜时间：120min

设备名字 Bio-Rad mini

一抗用的sigma 羊抗大鼠，0.2 mL包装的，打折后价格3000多，有些贵哦。

比例调整到1：1500左右条带可，用BSA封闭。但是背景稍高。

蛋白来源：脑组织

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：38 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜，

转膜方式（恒压、恒流）：80 v恒压

转膜时间：180 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad mini

蛋白来源：真核表达

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：约35 kD（双亚基）

WB用膜类型、孔径：0.22 um PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：恒流200 mA

转膜时间：60 min

转膜设备：湿转Bio-rad,天能，六一

转膜时间其实不需要那么长的，转膜没转上一般原因不在这里，可能是转膜液的原因：有些蛋白SDS可能影响其与膜的结合，还原型电泳因巯基乙醇的原因也可能导致后面的抗体不结合（这是我最近的经验教训），还有一抗的选择很重要，一定要选识别线性表位的抗体，才能用于做WB。

蛋白来源：细菌蛋白

蛋白名称（可保密）：全部的可溶性蛋白

蛋白分子量：11-170 KD

WB用膜类型、孔径：0.45 NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300 mA

转膜时间：80 min

蛋白来源：骨肉瘤细胞

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量： 72 kDa

WB用膜类型、孔径： PVDF膜(0.45 um)

转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒流200 mA

转膜时间： 20-30 min

转膜设备：Bio-Rad 型号忘了，就是有4个插孔的电泳仪。

建议改进方向：低温很重要，新鲜的电转液也很重要。

蛋白来源：骨肉瘤CELL LINE

蛋白名称（可保密）：Beta actin

蛋白分子量：42 kDa

WB用膜类型、孔径：Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size (Invitrogen)

转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒压22 v

转膜时间：90 min

转膜设备：X-cell Sure Lock Mini-cell (Invitrogen)

建议改进方向：转膜过程冰水浴，保持低温，Transfer Buffer重复使用。

蛋白来源：肾瘤细胞

蛋白分子量：39 kDa

WB用膜类型、孔径：Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size (Invitrogen)

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100 v

转膜时间：50 min

蛋白来源：MCF7

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：70 kDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜（GE）

转膜方式（恒压、恒流）：湿转 100伏

转膜时间：60 min

转膜设备：伯乐小转膜仪

蛋白来源：pichia 分泌表达

蛋白名称（可保密）：细胞因子等

蛋白分子量：17到30 kDa

WB用膜类型、孔径：millipore PVDF 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100 V

转膜时间：60 min

这个条件除了100 KDa的预染maker转的不好，剩下的条带都非常清晰。正向前面ycwzq说的，感觉时间不是很重要，只要蛋白别太小或太大，在一个比较宽的时间和电压范围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液。

所以建议把自己用的转印缓冲液的配方也贴上，便于分析交流。

我先说我的吧，是大师兄师姐的配方，我用了感觉还不错，但是100 KDa以上的转的不好。

蛋白转印缓冲液pH8.2:Tris碱1.93 g，甘氨酸9 g，甲醇200 ml，加水定容至1000 ml。

蛋白来源：大鼠坐骨神经

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量： 30 kDa

WB用膜类型、孔径： PVDF膜(0.2 um)

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300 mA

转膜时间： 45 min

转膜设备: Bio-Rad

蛋白来源：小鼠胚胎成纤维

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：36 KDa、55 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45

转膜方式（恒压、恒流）：0.3 A 恒流

转膜时间：60 min

转膜设备: 湿转 Bio-Rad mini

垫子变薄时，可用三层纤维垫，也没问题。

蛋白来源：小鼠前列腺癌细胞

蛋白名称（可保密）：P53 P21 RAD51 GAPDH

蛋白分子量：53 KDa、21 KDa、37 KDa、36 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45

转膜方式（恒压、恒流）：恒压110 v

转膜时间：60 min

转膜设备: 湿转 Bio-Rad mini

蛋白来源：HEK293总蛋白

蛋白名称（可保密）：**~K~Hspan~M~K~Hdiv~M~2~1~Kdiv~M~2~1~0~Kspan~M蛋白分子量：~200KD

WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.2 um (用甲醇预先处理)

转膜方式（恒压、恒流）：恒压 25 V

转膜时间：过夜 (~16-20 hours)

转膜设备:biorad mini

蛋白来源：人前列腺癌细胞

蛋白名称（可保密）：**~K~Hspan~M~K~Hdiv~M~2~1~Kdiv~M~2~1~0~Kspan~M蛋白分子量：~40 KD

WB 用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um (用甲醇预先处理)

转膜方式（恒压、恒流）：恒压 20 V，限制最高电流0.3 A。

转膜时间：过夜 (~16-20hours)

转膜设备：biorad semi-dry

蛋白来源：组织

蛋白名称（可保密）

蛋白分子量：42 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜（0.22）

转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流

转膜时间：60-90 min

转膜设备：湿转 Bio-Rad

蛋白来源：E.Coli BL21

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：4 kd

WB用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒压15 v

转膜时间：O/N

转膜设备: Bio-Rad Mini 湿转

转膜液的配制：for 1 L transfer buffer， 200 ml Methanol，14.4 g Glycine，3.03 g Trizma-base。

用了Trcine-gel SDS Page，效果不错

蛋白来源：肾脏

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：23 kd

WB用膜类型、孔径：PVDF 0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒压20 v

转膜时间：35 mins

转膜设备: Bio-Rad 半干

蛋白来源：来自MDCK增殖的流感病毒裂解物

蛋白名称（可保密）：PB1

蛋白分子量： 96 kd （注意，10% SDS-PAGE，冰上电泳。用预染marker观察100kd的条带跑到胶的正中间位置时，才开始转膜，否则转膜效率降低）

WB用膜类型、孔径： NC膜， 0.45

转膜方式（恒压、恒流）：恒压，100V

转膜时间： 2 hours

转膜设备: BIO-rad 转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。

转膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加SDS以及多大质量浓度等）： 2.9 g甘氨酸，5.8 g tris，0.37 g SDS，200 ml甲醇。

蛋白来源：肾脏

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：9 kd

WB用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um

转膜方式（恒压、恒流）：恒压20 v

转膜时间：30 min

转膜设备: Bio-Rad 半干

蛋白来源：软骨细胞

蛋白名称（可保密）：b-actin

蛋白分子量： 43 kd

WB用膜类型、孔径： PVDF膜， 0.45

转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流，350 mA

转膜时间： 85 min

转膜设备: BIO-rad 转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。

转膜液的配制：（2.92 g甘氨酸，5.8 g tris，0.375 g SDS，200 ml甲醇，用双蒸水定容到1 L）

蛋白来源：宫颈癌细胞

蛋白名称：保密

蛋白分子量：60 kD

WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 uM

转膜方式（恒压、恒流）：恒流，按膜的面积来算电流，标准大小的膜-60 mA/张

（8.2 cm x 6.0 cm)

转膜时间：2 h

转膜设备：Biorad semi-dry

转膜液的配制：Boston Bioproduct Transfer buffer+10-20% 甲醇

建议改进方向：

做半干转的时候，三明治上面再压一张滤纸，可以保证压紧，转膜效率稳定。用这个条件做过不少不同分子量的蛋白，最小从15 kD，到最大235 kD，都可以得到稳定结果。转膜液只用一次，不重复使用。

蛋白来源：家牛肝细胞

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：30 kDa

WB用膜类型、孔径：NC， 6x8 cm， 0.45 um

转膜设备：Invitrogen 湿转，外层冰水浴冷却。

转膜方式（恒压、恒流）：恒流170 mA

转膜时间：根据胶的厚度而定，每0.5 mm转30 min， 1.5 mm的超厚预制胶转1.5-2 h。

转膜液的配制：10 mM碳酸氢钠，3 mM碳酸钠，20%甲醇。

建议改进方向：已考染的胶脱色后可以用此法转膜，条带稍淡但不影响结果。

蛋白来源：组织

蛋白名称（可保密）

蛋白分子量：170 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜（0.45）

转膜方式（恒压、恒流）：300 mA 恒流

转膜时间：170 min

转膜设备: 湿转 Bio-Rad

蛋白来源：HepG2细胞

蛋白名称（可保密）：Akt及P-Akt

蛋白分子量：55KDa/56KD

WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45孔径

转膜方式（恒压、恒流）：100V 恒压

转膜时间：75 min

转膜设备: 湿转 Bio-Rad

蛋白来源：大鼠

蛋白名称（可保密）：Bactin（42 KDa）

WB用膜类型、孔径：PVDF（0.45）膜

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流150 mA

转膜时间：100 min

转膜设备: 北京六一

蛋白来源：大鼠大脑皮质

蛋白名称（可保密）：b-actin

蛋白分子量： 43 kd

WB用膜类型、孔径： PVDF膜， 0.45

转膜方式（恒压、恒流）：半干转，恒流，2 mA/cm²

转膜时间： 8-55 min

转膜设备: BIO-rad 转膜设备。

转膜液的配制：（2.92 g甘氨酸，5.8 g tris，0.375 gSDS，200 ml甲醇，用双蒸水定容到1 L）

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