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🔥 阳性杂交瘤细胞的筛选

免疫荧光技术是指将抗原抗体反应和荧光标记技术联合使用以鉴定阳性杂交瘤细胞株的方法。

实验概况收录 4 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章

单克隆抗体的制备

通过细胞融合技术（如 PEG 诱导法）将产生单一抗体的一种免疫动物 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，这种由单个克隆细胞产生的抗体分子称单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）。经 HAT 选择培养基的选择，只有融合成功的杂交瘤细胞（既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又具有免疫 B 淋巴细胞合成分泌特异性抗体的能力）才能继续生长，通过免疫学检测和单个细胞培养，最终获得既能产生单一抗体、又能不断增殖的杂交瘤细胞系。这种细胞经过扩大培养，再接种于小鼠腹腔，即可在其腹

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杂交瘤细胞接种

1. 用 20-G 或 22-G 的注射针，往小鼠腹腔内注射降植烷，每只鼠 0.5～1 ml，1 周后接种细胞。2. 在 175 cm2 培养瓶中加完全 DMEM - 10 / HEPES /丙酮酸钠培养液，进行杂交瘤细胞的培养，使细胞生长至对数期。3. 将培养液转入 50 ml 锥形离心管中，室温下 500 g，离心 5 min。弃上清。4. 细胞重悬于 50 ml 无菌的 PBS 或 HBSS （不含 FCS ）中洗涤。于室温下 500 离心 5 min , 弃上清。重复 2 次

操作方法所属实验：单克隆抗体腹水制备实验

利用 IHC 法筛选阳性杂交瘤细胞

免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是以免疫学的抗原-抗体反应为理论基础，使用标记的特异性抗体，在细胞组织中检测和定位抗原（例如蛋白质）的技术。这种方法利用了抗体与抗原之间的特异性结合。在阳性杂交瘤的筛选中，IHC 可以用来确定杂交瘤细胞是否产生了目标抗体。

操作方法所属实验：🔥 阳性杂交瘤细胞的筛选

问杂交瘤细胞融合

土井挞克树

我一般会加氨基酸和细胞因子，这样细胞长的好一些。

实验问答2 回答460 围观

问杂交瘤细胞培养用啥血清？

努力自学的搬砖苗

胎牛血清和新生牛血清都可以。国产进口都可以。用的四季青的养的可以，过期的养的也可以。杂交瘤状态比较好的时候可以用10%，状态不好稍微提高下血清比例也可以。

实验问答1 回答499 围观

Expanding Hybridoma（杂交瘤细胞） Clones

Borrowed from David Bowtell (bowtell@ariel.ucs.unimelb.edu.au) Transfer the srongest positive clones to a 24 well plate by scraping the adhering cells with a truncated yellow tip. Bring the volume to 1 ml using

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Expanding Hybridoma（杂交瘤细胞） Clones

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单克隆抗体腹水制备实验

与多克隆抗血清相比，采用单克隆抗体（MAb) 的最主要的优势就是有可能得到大量的特异性单克隆抗体可供应用。MAb 制剂通常包括杂交瘤上清、由接种了杂交瘤的小鼠制备的腹水，以及纯化的 MAb。腹水中包含有高浓度的 MAb，但它不是纯的 MAb 制剂。为得到纯化的制剂，可以把培养上清或腹水拿来进行亲和层析。绝大多数杂交瘤可以长成为腹水瘤。MAb 在这种腹水中的饱和浓度可达 1:500 的滴度。来源：《精编分子生物学实验指南（第五版）》

实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章

单克隆抗体的制备

实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关问答 · 3 相关文章

🔥 利用流式筛选阳性杂交瘤细胞

流式细胞仪基于对荧光标记抗原与抗体亚型结合免疫球蛋白作为筛选指标，能够全自动、快速、高效地对针对抗原特异性且活的杂交瘤细胞进行筛选。

操作方法所属实验：🔥 阳性杂交瘤细胞的筛选

杂交瘤细胞的染色体分析实验

杂交瘤细胞的染色体分析实验目的是为了明确杂交瘤细胞染色体的变化。正常小鼠脾细胞有 40 条染色体，且全部为端着丝点染色体（telocentric chromosome）；小鼠骨髓瘤细胞染色体数目变异较大，如 SP2/0 细胞为 62－68 条，NS－1 细胞为 54－64 条，大多数为非整倍性，且有中部着丝点染色体（metacentricchromosome）和亚中部着丝点染色体（submetacentricchromosome）等标志染色体。当小鼠脾细胞与小鼠

操作方法所属实验：单克隆抗体鉴定实验

问阳性杂交瘤细胞培养

Eason老歌迷

你这个明显是细胞污染了，你可以先用显微镜观察，看看它有没有游动，我感觉是真菌污染。

实验问答1 回答277 围观

问杂交瘤细胞

土井挞克树

死细胞太多了考虑有污染因素，建议检查污染。

实验问答3 回答358 围观

杂交瘤细胞的保存

（一）保存当获得产生所需的单克隆抗体的杂交瘤细胞 后，必须将一部分杂交瘤细胞 保存，否则在连续传代的过程中，可能产生突变或染色体的漂移以至丧失固有特性或丢失产生抗体的特性。另外在长期的培养过程中，难免不发生污染以至于毁灭。所以必须冷藏保存一部分。保存方法如下： 1．材料 (1) 细胞：取对数生长期的细胞。 (2) 10％二甲基亚砜保护液（二甲基亚砜能损坏滤器，而又被高压所破坏

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杂交瘤细胞的制备

相关专题 1）瘤细胞培养（无特殊要求）骨髓瘤细胞呈悬浮或轻微附着形式生长，如附着性生长的细胞多时，用吸管轻轻吹打或轻轻叩击培养容器即可分离下来。通常要维持细胞于指数生长期（细胞培养时间为15~20小时），每3~5天取细胞0.2~1ml移入到10ml新培养液中，其最大细胞密度不能超过5×105~106/ml。一般使用含有高糖的DMEM 培养液，并补加有pH的稳定剂HEPES。 2）免疫小鼠和脾细胞

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单克隆抗体鉴定实验

单克隆抗体鉴定实验鉴定指标有些与多克隆抗体的相同, 所采用方法可通用; 但有些指标的鉴定则具有 McAb 的特殊性. 目前, 单克隆抗体鉴定实验主要有 7 种: 抗体效价鉴定实验、抗体特异性鉴定、McAb 的 Ig 类、亚类及型的鉴定实验、杂交瘤细胞的染色体分析、McAb 中和活性的鉴定实验、McAb 识别抗原表位的鉴定实验和 McAb 亲和力的鉴定实验.

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免疫球蛋白纯化技术

在大多数情况下，免疫血清、杂交瘤细胞培养上清以及腹水中的抗体需经纯化后再用于各种免疫学检测中去。免疫球蛋白常用的纯化方法有盐析法、凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析以及高效液相色谱等方法。（来源：医学基础免疫学实验指导，主编金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界图书出版社，1990）

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无胸腺裸鼠的预刺激和杂交瘤细胞的注射

一、材料5 只 7〜8 周龄雌性无胸腺（nu/mi) 裸鼠PristaneCSigma T-7640)Tuberculin 注射器(Iml)无菌针头（2 5 号）无菌针头（2 1 号）杂交瘤细胞，5 X106 个细胞/只小鼠0.4 % 的台酚蓝染液（Sigma T 8154)无菌尖底离心管（15m l 或 50 ml)无菌 D-PBS二、设备血球计数板光学相差显微镜台式离心机三、时间要求Pristane 预刺激 5 只小鼠约需10min。完成两次 Pristane 注射，第一次预刺激应

操作方法所属实验：单克隆抗体制备-小鼠腹水实验

单克隆抗体的制备实验

融合较适宜。已有人报道采用脾内免疫，可提高小鼠对抗原的免疫反应性，且节省时间，一般免疫3天后即可融合。细胞融合首先制备细胞培养基、氨基喋呤（A）贮存液、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷（HT）贮存液等各种细胞生长所需的营养物质。然后制备髓瘤细胞和脾淋巴细胞，之后进行细胞融合。在细胞融合后选择性培养过程中，由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活，通常必须加入其他活细胞使之繁殖，这种被加入的活细胞称为饲养细胞。饲养细胞促进其他细胞增殖的机制尚不明了，一般认为它们可能

操作方法所属实验：单克隆抗体的制备实验