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🔥 阳性杂交瘤细胞的筛选

实验分类:

细胞实验

最新修订时间:

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合作专家 | 农晓静硕士

药学 上海交通大学

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审核专家 | 郭雅婕博士

生物化学分子生物 中国科学院大学

简介

免疫荧光技术是指将抗原抗体反应和荧光标记技术联合使用以鉴定阳性杂交瘤细胞株的方法。

原理

根据抗原抗体反应的原理,先固定表达抗原的细胞,而后加入杂交瘤上清液(一抗),最后加入 FITC-二抗检查细胞内外是否有单克隆抗体结合。

若为阳性杂交瘤细胞株,则可在细胞上形成具有荧光素的抗原抗体复合物。荧光素受激发光照射会发出明亮的荧光,用荧光显微镜观察可以看到是否有荧光存在以及荧光强度,从而确定杂交瘤细胞株是否为阳性,并进行定量。

应用

阳性杂交瘤细胞株筛选等。

来源:

操作方法

🔥 免疫荧光技术

免疫荧光技术是指将抗原抗体反应和荧光标记技术联合使用以鉴定阳性杂交瘤细胞株的方法。

🔥 elisa 法

ELISA 法是一种免疫测定技术,利用抗原抗体结合的手段,实现细胞或组织内生物活性物质的检测和定量。融合后的杂交瘤细胞可以产生大量相同的抗体,而细胞融合是一个随机的过程。在已经融合的细胞中,有相当比例的无关细胞的融合体,需进行筛选和克隆化,而这种杂交瘤阳性克隆的筛选中,需对单克隆抗体进行检测,常用方法有酶联免疫吸附试验(ELISA),间接血凝试验(PHA),放射免疫测定(RIA)、直接和间接荧光抗

🔥 利用流式筛选阳性杂交瘤细胞

流式细胞仪基于对荧光标记抗原与抗体亚型结合免疫球蛋白作为筛选指标,能够全自动、快速、高效地对针对抗原特异性且活的杂交瘤细胞进行筛选。

利用 IHC 法筛选阳性杂交瘤细胞

免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)是以免疫学的抗原-抗体反应为理论基础,使用标记的特异性抗体,在细胞组织中检测和定位抗原(例如蛋白质)的技术。这种方法利用了抗体与抗原之间的特异性结合。在阳性杂交瘤的筛选中,IHC 可以用来确定杂交瘤细胞是否产生了目标抗体。

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