单克隆抗体的制备

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

通过细胞融合技术（如 PEG 诱导法）将产生单一抗体的一种免疫动物 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，这种由单个克隆细胞产生的抗体分子称单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）。经 HAT 选择培养基的选择，只有融合成功的杂交瘤细胞（既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又具有免疫 B 淋巴细胞合成分泌特异性抗体的能力）才能继续生长，通过免疫学检测和单个细胞培养，最终获得既能产生单一抗体、又能不断增殖的杂交瘤细胞系。这种细胞经过扩大培养，再接种于小鼠腹腔，即可在其腹水中得到高效价的单克隆抗体。

杂交瘤技术制备单克隆抗体的步骤包括：抗原制备，动物免疫，免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备，细胞融合，杂交瘤细胞的选择培养，杂交瘤细胞的筛选，杂交瘤细胞的克隆化，单克隆抗体的鉴定，分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立，单克隆抗体的制备。

原理

单克隆抗体的制备原理是利用 HAT 选择培养基，只有融合成功的杂交瘤细胞（既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又具有免疫 B 淋巴细胞合成分泌特异性抗体的能力）才能继续生长，通过免疫学检测和单个细胞培养，最终获得既能产生单一抗体、又能不断增殖的杂交瘤细胞系。

HAT 的筛选原理为：HAT 含有次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T），正常细胞合成 DNA 有主路和旁路两条途径，氨基蝶呤（A）能阻断正常细胞 DNA 主路合成中二氢叶酸到四氢叶酸途径，所以只有能利用次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）进行旁路 DNA 合成的野生型细胞才能存活。骨髓瘤细胞系是经筛选出的基因突变缺陷型瘤细胞株，即次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型（HGPRT-）或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）。未融合的骨髓瘤细胞由于 DNA 合成主路被氨基蝶呤阻断，又不能利用旁路合成 DNA，所以不能继续生长存活；免疫动物的脾淋巴细胞在普通培养液中不能增殖而将自然死亡。而杂交瘤细胞由于含有来自亲代脾淋巴细胞的 HGPRT＋的补偿，可利用次黄嘌呤合成 DNA 而能够克服氨基蝶呤的阻断，故杂交瘤细胞可大量繁殖而被筛选出。

来源：丁香实验团队

操作方法

单克隆抗体的制备