无胸腺裸鼠的预刺激和杂交瘤细胞的注射

一、材料

5 只 7〜8 周龄雌性无胸腺（nu/mi) 裸鼠

PristaneCSigma T-7640)

Tuberculin 注射器(Iml)

无菌针头（2 5 号）

无菌针头（2 1 号）

杂交瘤细胞，5 X10⁶ 个细胞/只小鼠

0.4 % 的台酚蓝染液（Sigma T 8154)

无菌尖底离心管（15m l 或 50 ml)

无 菌 D-PBS

二、设备

血球计数板

光学相差显微镜

台式离心机

三、时间要求

Pristane 预刺激 5 只小鼠约需10min。 完成两次 Pristane 注射，第一次预刺激应在注射 杂 交 瘤 细 胞 前 12d 完 成 。杂 交 瘤 细 胞 需 提 前 培 养 ：注射用细胞 的 准 备 大 约 需 要 用30 min，细胞注射大约需要用 10min。

四、步骤

1.计划注射杂交瘤细 胞 前 12d，用 2 5 号针给每只小鼠注射0.5 ml Pristane 进行预刺激。腹腔注射过程与 BALB/c 小鼠的操作相似。 Pristane 更易顺着裸鼠无毛光滑皮肤上的针孔回流：简单地握住针头使针筒内无压力并将针头轻轻退出，这样操作对避免出现上述情况是必要的。

2.注射细胞前两天重复 Pristane预刺激步骤，Pristane 0. 2m l/只。

3.应提前培养，计数杂交瘤细胞，为注射作准备，方 法 同 BALB/c 小鼠腹水的制备。

4.用 带 有 2 1 号针头的无菌注射器均匀吸取备好的细胞悬液后向小鼠腹腔注射0.5 ml，注射的部位和方式与 Pristane预刺激的操作相同 [见步骤（1)]。

5.观察注射杂交瘤细胞后的小鼠 24 h 并且至少要在其后隔天观察其一般状况和腹水产生情况。