用 免 疫 抑 制 的 BALB/c 小鼠制备腹水

一、 材料

小鼠：经 Pristane 预刺激的 4 只雌性老年 BALB/c 小鼠

PristaneCSigma T-7640)

Tuberculin 注射器（Iml)

无菌针头（2 1 号）

无菌针头（30 号）

氢化可的松琥拍酸醋（hydrocortisone 21-hemisuccinate， Sigma H4881)，6 mg/ml 溶于无 菌 D-P B S 中

杂交瘤细胞，5X10⁶ 个细胞/只小鼠

0.4% 的台酚蓝染液（Sigma T8154)

无菌尖底离心管（15 ml 或 50 ml)

无 菌 D-PBS

二、设备

血球计数板

光学相差显微镜

台式离心机

铯同位素 y 射线照射器

三、 时间需求

用 Pristane 预 刺 激 4 只小鼠需 lOmin。准备和注射氢化可的松琥珀酸酷需 45 min，7射 线 照 射 4 只 小 鼠 需 10min。杂 交 瘤 细 胞 需 提 前 培 养 ：注射 用 细 胞 的 准 备 大 约 需 要30 min，细胞注射大约需用 10min。

四、步骤

1.杂交瘤细胞注射前 U d 用 Pristane 预刺激小鼠 (见「小鼠的预刺激和杂交瘤细胞的注射」）。

2.杂父瘤细胞注射則二天，用 装 有 30 号 针 头 的 Iml Tuberculin 注射器在每只小鼠一条腿的臀部肌肉上注射 0.5m l 的氢化可的松琥珀酸酯。

3.杂交瘤细胞注射前 2d，用 550rad①亚致死剂量的 7 射线照射小鼠。

4.准备和注射杂交瘤细胞及收获腹水的步骤见「小鼠的预刺激和杂交瘤细胞的注射」和「腹水采集」。

五、结果

通常杂交瘤细胞在同种异型小鼠中的生长速度较同基因杂交瘤细胞在 B A LB /c小鼠中的生长速度要慢得多，即使同种异型小鼠是处理后为免疫缺陷或免疫抑制的。因此，腹水形成更加缓慢。通常小鼠在注射杂交瘤细胞后 10〜14d 就可准备第一次收获腹水(穿刺放液），但 如 果 30d 后仍无腹水产生，则表明操作失败。
从每只小鼠收获的腹水体积范围可能达到 2〜10m U 腹水中单克隆抗体的含量范围为 1〜10 mg/ml，即 4 只免疫抑制型小鼠可能产生 10 〜20mL腹 水 ，含 10〜200mg 抗体。各杂交瘤细胞系间和相同杂交瘤细胞系的各批次间腹水的产量会有变动。