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科研学霸天团,48小时有问必答
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请问hepG2细胞想做抗氧化都需要建立什么模型,我之前养巨噬细胞知道要建立炎症模型,那这个肝癌细胞要建立啥怎么去建立?
loveliufudan
在体外实验中,建立抗氧化模型常常使用一些氧化应激诱导剂来诱导氧化应激,然后检测细胞对这种应激的反应。在肝癌细胞HepG2中,常用的氧化应激诱导剂包括氢过氧化物(H2O2)、四氢喹啉醌(t-BHP, tert-butyl hydroperoxide)等。具体操作步骤大致如下: 1. 将HepG2细胞在适当的培养条件下生长到适当的数量和密度。 2. 添加氧化应激诱导剂,如H2O2或t-BHP,以诱导氧
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问
THP-1细胞经过PMA诱导成M0后IL-1b分泌量很高
loveliufudan
对于你所观察到的IL-1β高表达的情况,有几个可能的解释: 1. PMA诱导的剂量或时间可能较高或较长,过度刺激了THP-1细胞,导致它们产生炎症反应。你可以尝试减少PMA的浓度或缩短处理时间,看是否能降低IL-1β的水平。 2. PMA自身具有刺激活性,可能会诱导细胞产生炎症反应。一些研究已经显示,PMA可以刺激细胞产生炎症细胞因子。 3. 如果你使用的是酶联免疫吸附试验(ELISA)或者其他类
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问
请问悬浮细胞能做transwell实验吗,有具体protocol吗?
balalaLy
跟贴壁细胞大同小异(1)悬浮细胞最好在前一天进行饥饿处理(即无血清培养基过夜培养,以便增强细胞迁移能力);(2)实验当天,收集细胞,离心去上清,用无血清培养基重悬,计数;(3)每组细胞的配制:每组 3 复孔。按照每孔 10^5 个细胞 / 200 μl 的量配制 4 个复孔的用量(多配 1 孔),即 4×10^5 个细胞 / 800 μl;(4)transwell 下室加入 700-800 μl
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问
请问一下,DAPI染昆虫精子时,精子都缠绕在一起很难进行计数,应该怎么将其分散开
loveliufudan
昆虫精子缠绕在一起可能是由于精子的凝集,有一些方法可以试试看: 1. 淡化样品:你可以尝试将精子液进一步稀释,使精子密度降低,从而减少精子之间的相互作用和凝集。 2. 改变pH:精子凝集可能与pH有关。你可以尝试调整你的液体介质的pH值,看看是否能够影响精子的凝集程度。 3. 增加润湿剂:有些润湿剂可以阻止精子的凝集。然而,要注意这可能会影响你的染色或其他后续步骤。 4. 增加搅拌或振动:轻微的搅
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问
为啥有些蛋白的WB是两条条带?
王堇文
1.可能你的蛋白有一定降解,分子量小的蛋白有时候出现这种情况几率比较好的。目的蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗体结合2.可能是WB到了该蛋白的同源二聚体3.可能抗体有时候特异性不高会出现别的杂带
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问
统计学上的F和p是代表啥意思。
feixue7758527w
统计学上F值是F检验的数值,F检验叫方差齐性检验,两个总体中抽取样本,然后进行比较。P值代表结果可信度,一般小于0.05属于有统计学差异,小于0.01属于有显著统计学差异。
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问
dapi染核,胞质也有什么原因
王堇文
因为染料进入死细胞。其实染的就是细胞核。细胞死后膜通透性增加,dapi穿过膜进入细胞,将细胞核染色,显微镜调好的话,还是能看见细胞的胞质部分。
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问
shRNA和siRNA的敲减效率问题?
是TTT
这是合理的,siRNA进入细胞后直接结合mRNA上互补序列,从而阻碍基因表达,而shRNA需要切割为siRNA才能发挥同样的作用
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问
与自噬息息相关的微管结合蛋白轻链lc3和微管的关系是怎么样的?
loveliufudan
关于LC3和微管的关系,目前的研究认为微管在自噬过程中的主要作用是帮助自噬体的运输和定位,以及自噬体与溶酶体的融合。LC3虽然在自噬过程中起着关键作用,但其主要的作用并不在于直接与微管互作,而是标记和形成自噬体。然而,值得注意的是,自噬过程中的各种蛋白质相互作用非常复杂,可能还存在许多尚未发现的机制。例如,一些研究发现,有些微管关联蛋白(如HDAC6)可以识别并结合到LC3,进一步促进自噬体的运输
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Edu检测中间哪几步可以暂停?(也就是时间延长)做实验鲁莽了实在不想半夜三点来做实验
dxyc42u
最好不要停顿,我们试过停顿的话效果不好
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CHOK1细胞冻存,冻一个12孔板的孔可以吗
dxyc42u
可以的,如果冻存液好用的话就没问题
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TGF-B刺激LX-2前,LX-2如何进行饥饿培养?继续使用高糖培养基?只有血清浓度改变了吗?
loveliufudan
对于LX-2细胞,饥饿培养的具体步骤可能是这样的: 1. 先将细胞在含有正常血清浓度(通常是10%)的培养基中培养至适当的细胞密度。 2. 然后用血清浓度较低(如0.5%或1%)或无血清的培养基替换原来的培养基,将细胞饥饿一段时间(如12到24小时)。 3. 在饥饿培养后,再添加TGF-β刺激细胞。关于培养基的糖浓度,一般情况下,高糖或低糖培养基的选择取决于你的实验目标和细胞类型。对于大部分的细胞
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tranwell求助染完色之后看不见孔也看不清细胞形态
balalaLy
黑色的那种颗粒状的应该是孔,是不是你的结晶紫染液溶度太高或者没有洗干净?
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问
是污染吗?
相守RGXS
看样子像是污染,建议重新培养。
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问
铁死亡研究为什么要测总铁水平?
huarenqiang5
因为铁死亡主要依据总铁水平变化来进行判断。
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问
BMDM形态
huarenqiang5
从图片来看,形态还行,可以继续养养看。
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问
Dmso稀释药物浓度
balalaLy
溶液量可以四舍五入,分子量不能。取值取到小数点后两位数就可以了。
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免疫荧光dapi染色求助
balalaLy
dapi这个染料很稳定很容易染色,一般不会有质量问题,应该是冰冻的问题,没有固定好,细胞发生肿胀。
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问
请求大神看看这是什么污染
dxyc42u
应该是细菌和真菌同时污染了:。
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问
请问有人知道那种荧光滤纸在哪买吗
dxyc42u
试剂代理商那都能买到,这个很常规
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