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免疫荧光染色
sswei
由于抗体纯度不够、亲和力不强、特异性不好所致。
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问
主动脉DHE染色
loveliufudan
在主动脉DHE染色中,如果存在氧化应激,您可能会观察到以下情况: 1. 强烈的红色荧光:在主动脉组织中,氧化应激会导致DHE染色产生强烈的红色荧光。荧光的强度可以用来反映氧化应激程度的高低。 2. 组织区域的差异:氧化应激可能在组织中的不同区域表现出差异。您可能会观察到特定区域的红色荧光更强,这可能表示该区域受到氧化应激的影响较大。 3. 细胞定位的变化:氧化应激可能导致荧光信号在不同的细胞定位上
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问
卢卡斯快蓝染色如何做统计
loveliufudan
要在ImageJ中对Luxol Fast Blue染色进行分析,您可以遵循以下步骤:1. 打开图像:在ImageJ中打开您的Luxol Fast Blue染色图像。2. 确定感兴趣区域(ROI):根据您的研究目的,选择要分析的感兴趣区域。这可能是整个图像、特定区域或细胞结构等。使用ImageJ中的选择工具(如矩形、椭圆或多边形选择工具)在图像上绘制ROI。3. 设置阈值:使用阈值功能将染色区域从背
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问
细胞培养过程中,直径异常变大,与什么因素有关?
细水长流NAPI
我考虑是细胞水肿凋亡的可能性比较大
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问
贴壁细胞不知道什么污染了,细胞变圆聚团,底下像糊了一层
huarenqiang5
考虑是支原体污染了,建议及时处理。
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问
细胞状态很好,传代后状态变差,有可能是什么原因
dxy_75gr498r
细胞自身原因,细胞衰老技术员操作问题血清问题,内毒素<10% 参数,也会影响细胞传代效果。总结:实验要求不同,各项参数要求不同,所以结果也不同,因人而异,达到想要结果就OK。
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问
细胞实验中,细胞养着养着突然状态就不好了,所有条件都没有变,这是为什么呢?
毛利小五郎的徒弟
可能是细胞老化了,细胞随着培养时间延长会逐渐老化,这时候细胞状态就不好了
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问
培养人体细胞选择什么血清比较好?
细水长流NAPI
培养人体细胞建议选用胎牛血清更好一些
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问
有没有方法或软件对培养的细胞显微照片进行分析,直接提示哪个孔可以传代了?
huarenqiang5
目前还没有什么软件可以直接提示哪个孔可以传代了。
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问
对于贴壁不牢的细胞,怎么让它更牢固?
huarenqiang5
1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度;2.分离培养物,检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物;3.使用无菌酸溶液调整pH值或充入无菌CO2 ;4.启用新的保种细胞 ;5.调节最佳接种细胞浓度。
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问
贴壁癌细胞胰酶消化过程中,几乎所有细胞都已变圆,也可以看到细胞脱落,但是用培养基中和后还是会发现很多变圆后的细胞贴壁消化不下来?
毛利小五郎的徒弟
培养基中细胞的消化要比贴壁细胞难消化,一般培养基消化除了胰酶浓度需要调高外,还要添加edta
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问
加细胞悬液是直接加到100μl培养基里还是细胞悬液体积+培养基一共100μl?
huarenqiang5
加细胞悬液一般情况下都是直接加到100微升培养基里面。
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问
肿瘤细胞早凋和晚凋大概在什么百分比区间,还有就是相差多少可以视为有差异?
毛利小五郎的徒弟
之前有文献显示肿瘤细胞早凋和晚凋的比例大致在15%左右,做实验如何显著性差异小于0.05说明有差异
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问
自己搭配抗体太麻烦了,tf有没有常见免疫细胞的培养+流抗检测方案?
毛利小五郎的徒弟
可以用酶联免疫试剂盒做免疫细胞培养,后续用同一抗体做流抗
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问
除了染菌,有时长小黑点,小黑点在高倍镜下不游动,不像黑胶虫,是支原体污染吗?
毛利小五郎的徒弟
如果不是黑胶虫的话,而且不具有游动性,大概率是细胞碎片,可以冲洗去除
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问
如何准确进行细胞计数?比如获取准确数量的少量细胞。
huarenqiang5
在计数板上用显微镜自己数出来就可以获取准确数量的少量细胞。
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问
悬浮细胞总是在孵抗体和洗的时候被冲掉,悬浮细胞做免疫荧光怎么固定;
毛利小五郎的徒弟
悬浮细胞固定:细胞长好后一定固定好,非常影响后面拍片,4% 多聚甲醛、甲醇、丙酮均是可选用的固定液,固定时间在 10-15 分钟即可。记得之前用PBS清洗一次;另外可以使用PDL处理过的玻片,效果还行,很少脱片。
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问
请问悬浮细胞的免疫荧光,用什么方法进行贴壁效果更好。
毛利小五郎的徒弟
1. 爬片,一定要注意密度密度!!细胞不能太多,连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少,这样细胞也会被洗掉,拍照效果不理想。正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可,在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上,会导致细胞形态和培养瓶内不一致,可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片,再接种细胞即可;2. 固定固定,细胞长好后一定固定好,非常影响后
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问
细胞免疫荧光多色共染定位(靶蛋白有3个不包括dapi),推荐哪几种颜色
sswei
目前IF双标一般优先选择红色和绿色;如果是三标,则第三种颜色选择蓝色。
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问
共聚焦小皿固定以后细胞用pbs洗容易飘,有没有好一点的解决办法,2细胞本身转染了带mcherry的慢病毒,两个靶蛋白共定位的话选
huarenqiang5
建议爬片或者共聚焦皿用多聚赖氨酸和层粘连蛋白进行预处理。
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