悬浮细胞总是在孵抗体和洗的时候被冲掉，悬浮细胞做免疫荧光怎么固定；

悬浮细胞固定：细胞长好后一定固定好，非常影响后面拍片，4% 多聚甲醛、甲醇、丙酮均是可选用的固定液，固定时间在 10-15 分钟即可。记得之前用PBS清洗一次；

另外可以使用PDL处理过的玻片，效果还行，很少脱片。

调整细胞数在10的6-7次方左右。PLL处理好的载玻片首先在－20℃预冷10分钟，用取20-30ul滴在载玻片上，不动它，一张片子可以滴2-3个地方，将滴好的载玻片置于50℃左右烤干，大约10min左右，注意不要烤太久，干了就行，取出后冰丙酮固定即可。

悬浮细胞的贴壁效果主要取决于玻片（悬浮细胞专用的免疫荧光玻片）。可以使用多聚赖氨酸处理过的玻片，用移液管吸取适量的悬浮细胞液，滴在载玻片上，等待一段时间，让液体自由的铺散开来，以形成一单分子层结构，并于室温下让细胞悬浮液自由干燥，使细胞不易随液体流动。用免疫荧光专用的画笔在干燥的液面边缘划圈，以免后续的操作时液体流失。另外每次孵育和洗的过程中加/吸液体要注意缓慢轻柔操作。