请问悬浮细胞的免疫荧光，用什么方法进行贴壁效果更好。

1. 细胞片制备，一定要注意密度密度！！细胞不能太多，连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少，这样细胞也会被洗掉，正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可，在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上，会导致细胞形态和培养瓶内不一致，可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片，再接种细胞即可；将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。

1. 爬片，一定要注意密度密度！！细胞不能太多，连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少，这样细胞也会被洗掉，拍照效果不理想。正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可，在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上，会导致细胞形态和培养瓶内不一致，可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片，再接种细胞即可；

2. 固定固定，细胞长好后一定固定好，非常影响后面拍片，4% 多聚甲醛、甲醇、丙酮均是可选用的固定液，固定时间在 10-15 分钟即可。记得之前用PBS清洗一次；

3. 通透液的问题，杂质也可能影响你的成片；一般用TritonX-100（PBS 配制），具体浓度自行配制，0.2，0.3%都行.

4.可以使用PDL处理过的玻片，效果还行，很少脱片。

悬浮细胞的贴壁效果主要取决于玻片（悬浮细胞专用的免疫荧光玻片）。可以使用多聚赖氨酸处理过的玻片，用移液管吸取适量的悬浮细胞液，滴在载玻片上，等待一段时间，让液体自由的铺散开来，以形成一单分子层结构，并于室温下让细胞悬浮液自由干燥，使细胞不易随液体流动。用免疫荧光专用的画笔在干燥的液面边缘划圈，以免后续的操作时液体流失。