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请问悬浮细胞的免疫荧光,用什么方法进行贴壁效果更好。

相关实验:细胞免疫荧光

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实验室小助理夏奇

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4 个回答

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靶点科技

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建议使用靶点科技的悬浮细胞免疫荧光专用玻片。
1.取对数生长期细胞,计数后,用PBS洗涤,调整到2-5百万细胞/ml。

2.取150ul左右,加大约30万个细胞,滴加到玻片上。
3.静止30分钟,不要超过一个小时。
4.用PBS洗去没有固定牢固的细胞,就可以后续实验了

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sswei

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1. 细胞片制备,一定要注意密度密度!!细胞不能太多,连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少,这样细胞也会被洗掉,正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可,在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上,会导致细胞形态和培养瓶内不一致,可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片,再接种细胞即可;将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片,PBS洗两次;对悬浮生长细胞,取对数生长细胞,用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次,用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。


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土井挞克树

有帮助

1. 爬片,一定要注意密度密度!!细胞不能太多,连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少,这样细胞也会被洗掉,拍照效果不理想。正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可,在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上,会导致细胞形态和培养瓶内不一致,可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片,再接种细胞即可;

2. 固定固定,细胞长好后一定固定好,非常影响后面拍片,4% 多聚甲醛、甲醇、丙酮均是可选用的固定液,固定时间在 10-15 分钟即可。记得之前用PBS清洗一次;

3. 通透液的问题,杂质也可能影响你的成片;一般用TritonX-100(PBS 配制),具体浓度自行配制,0.2,0.3%都行.

4.可以使用PDL处理过的玻片,效果还行,很少脱片。

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赛默飞世尔科技

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悬浮细胞的贴壁效果主要取决于玻片(悬浮细胞专用的免疫荧光玻片)。可以使用多聚赖氨酸处理过的玻片,用移液管吸取适量的悬浮细胞液,滴在载玻片上,等待一段时间,让液体自由的铺散开来,以形成一单分子层结构,并于室温下让细胞悬浮液自由干燥,使细胞不易随液体流动。用免疫荧光专用的画笔在干燥的液面边缘划圈,以免后续的操作时液体流失。

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