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科研学霸天团,48小时有问必答
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请问抗体需要现定制,没有成品的,可靠吗?
Eason老歌迷
是的,我们实验室有几个抗体就是这样的,你只要找的公司靠谱就可靠。
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问
提取患者标本RNA
illusio
1.用小量提取多处理几个样品,合并后浓缩一下,或者冻干浓缩一下;2.尝试强力裂解液CLB,并且加大处理量,比如加大10倍处理量,然后用几个基因组先清除后,把所有的上清加到一个吸附柱上去,就能提高浓度
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问
跑胶拖带
whilt-shirt
有可能是模板出了问题导致没P出来
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问
救助|本科科研萌新,纯化的蛋白大小与预期大小不符
冷泉港蛋白
有下面几个原因:1.如果是蛋白降解,在36KD应该有条带,你仔细观察下,看看有没有。比较下未诱导和诱导的差别2.可能是序列中间有终止密码子,你看下测序结果。3.这种分析,最好有图
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问
20g小鼠眼球采血只有不到0.6ml 分离血清只有100ul多,请问有什么更好的采血方式呢?
Eason老歌迷
摘眼球取血,是大家常用的方法,简单、易操作,取血量大,当然缺点就是过于残忍还有就是心脏采,用1毫升的针管,也能采到将近1毫升,当然需要练练第三,可以麻醉了以后(用乙醚就可以),腹主动脉取,也用1毫升的针管子,采血量也很大。
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问
什么是WB阳性对照?β-actin难道不是阳性对照吗?
whilt-shirt
阳性对照指的是肯定能够达到预期效果的刺激, β-actin只是内参
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问
请问ELISA试剂盒检测MAC-T饥饿处理后的细胞培养上清,为什么无法计算出酪蛋白浓度?
illusio
对于目的蛋白浓度特别低的样本,可以尝试用高敏ELISA,但这也并不意味着一定能检测到样本浓度,只能说可以提高样本的可测率,并使结果更加可靠。因为通常用普通ELISA检测的样本OD值都偏低,而高敏ELISA可提高样本OD值,使之尽量位于标曲范围内,得到的数值也更加可信。
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问
WB结果
bamboopiggy
1.分装时要混匀,2,你上样的枪尖可能有差异,3,胶配的有问题,4,转膜有问题。5,抗体加的不匀
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问
【求助】WB的抗体--氨基酸末端抗原
Eason老歌迷
没啥影响,可以正常购买。你可以去一个专门对比抗体的网站查看,或者去文献里查看他们都用的什么类型的抗体。
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问
融合蛋白提问
bamboopiggy
你最好是在n端连GFP或者则就是c端去掉跨膜区以后,连GFP,否则,GFP可能检测不到。
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问
ip实验
冷泉港蛋白
你搜下,之前讨论过相关问题。涉及到蛋白互作研究的几个层次
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问
酶联免疫试剂盒检测细胞培养上清中的酪蛋白浓度时,若样本中酪蛋白浓度太低,怎样将样本浓缩?
麻黄连翘赤小豆
蛋白浓度低一般都没办法浓缩吧,除非和蛋白浓度高的样本混合
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问
磷酸化AKT WB实验复孔结果差异大
bamboopiggy
wb只要趋势一致就可以,不能要求量一定一样,因为跑胶,转膜,封抗体等,都会造成影响。
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问
血清离心上层分层,但是吸取的会带有红色的血
bamboopiggy
3000rpm 5min就够了,或者1000rpm 10min,你说的上层有血,应该是红细胞破了。看你要做什么实验了,有的红细胞破了没影响,有的不行。
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问
在进行底物TMB溶液显色后,酶标板中的孔有颜色但没有梯度,背景较高,常见原因有哪些?
HD8023
出现该现象的可能原因有底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存,实验前溶液已经变蓝。孵育温度过高或者孵育时间过长,发生了较强的非特异性吸附。没有按说明书要求洗板,特别是洗板时洗涤液的量少加了。加样时没有换枪头造成交叉污染。
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问
免疫共沉淀怎么才能去除IgG重链和轻链的条带?
冷泉港蛋白
1.首先看下原理:你可以选择原理二的试剂盒,看看是否可以解决你的问题2.调整胶浓度,或更换其他缓冲体系的PAGE,使轻链与目的条带分离开。3.就是调整抗体的种属了,不讨论了。4.应该有那样一种二抗,与变性的一抗不反应,只与天然的一抗反应,市场应该有吧?
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问
做wb,pcr 实验,解剖后新鲜组织可以先放-20度再转移到-80度吗?
bamboopiggy
最好直接放-80,速冻,否则组织容易降解。
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问
请问跑wb,pcr 需要多少组织量呢?
bamboopiggy
wb你最好测个蛋白浓度,20-40ug的上样量就可以,pcr,只要够提dna的就可以,大概绿豆到黄豆大小吧
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问
变性蛋白和非变性蛋白,哪个保存的更久
bamboopiggy
最好是变性,非变性的更容易降解。
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问
elisa实验可以用超纯水可替代双蒸水吗?
bamboopiggy
你说的超纯水是miliQ水么?是可以的。只要不含杂质和盐就可以。
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