dxy_lxzk22l7
请问RIPA提蛋白会改变蛋白结构吗?(我应用一个试剂盒测色氨酸,原理为色氨酸的侧链可发荧光,不知道用RIPA提取组织蛋白会不会影响试剂盒的使用)
土井挞克树
一般不会改变蛋白结构,但是在提取过程中理化性质改变也会引起蛋白降解
loveliufudan
RIPA缓冲液的作用是破坏细胞膜和细胞核膜,而不是直接改变蛋白质的结构。因此,用RIPA提取组织蛋白不会改变蛋白质的结构。
另外,RIPA提取液对色氨酸荧光检测可能会有影响,因为RIPA缓冲液中的表面活性剂和脱氧胆酸可能会与试剂盒中的荧光探针相互作用,导致荧光信号受到干扰或降低。建议在使用试剂盒前,将RIPA缓冲液从提取的组织蛋白样品中充分洗脱,以避免对检测结果的影响。
balalaLy
应该是怕RIPA中的某些成分影响试剂盒的显色反应吧,有些试剂盒会在说明书中提醒前期准备工作中不能使用哪些试剂,没有注明的话应该是不影响的
sswei
ripa破坏蛋白二级结构
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。
从提取蛋白自身的角度来考虑,ripa裂解液可以使蛋白质的空间结构破坏,即破坏蛋白质分子的二级和三级结构,从而使抗原决定簇得以充分暴露在外,更有利于被检测出来。
而从试剂盒本身的角度来考虑,以双抗体夹心法为例,提取的蛋白中含有ripa裂解液,当加入到包被的孔板当中时,可能同样会对孔板中的包被的抗体起到了裂解作用(如sds),从而使其失去该有的特异性,这方面可能需要考虑在内的。
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