原理
使用强大的晚期基因启动子表达的重组蛋白可以用放射性氨基酸标记，再用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。当使用早期或晚期基因启动子时，利用标记蛋白免疫沉淀能提高灵敏性和特异性。
材料与仪器
磷酸缓冲液（PBS） 细胞裂解液 [35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸
完全 MEM-5 培养基（含和不含蛋氨酸／半胱氨酸两种）
完全 MEM-5 培养基（含和不含蛋氨酸／半胱氨酸两种）
步骤
1. 培养细胞，用病毒感染细胞（见基本方案 4 步骤 1～4）。
2. 加入 2 ml 的完全 MEM-5 培养基，按所选用启动子的类型决定培养时间：早期启动子为感染后的 1~6 h；晚期启动子为感染后的 4~20 h。
3. 吸出培养基，加入含有 25~50 mCi [35S] 蛋氨酸或 [35S] 半胱氨酸的 0.5 ml 完全不含蛋氨酸或半胱氨酸的 MEM-5 培养基和 35 μl 完全 MEM-5 培养基，培养 2~3 h 到过夜。
4. 追加 0.15 ml 的完全 MEM-5 培养基，继续培养 1 h。
5. 吸出培养基，如果是分泌型表达蛋白则保存培养基。
如果分析培养基，将其离心 3 min 以去掉残留的细胞。
6. 加入 1 ml 的 PBS，刮下细胞，将其转入微量离心管，室温最大转速离心 3 min，弃上清。
7. 用 200 μl 细胞裂解液重悬细胞，涡旋混匀并在冰上放置 10 min。
8. 40℃，最大转速离心 10 min。吸出上清，进行免疫沉淀。
注意事项
1. 此单元的培养都在加湿的 37℃ 5% CO2 培养箱中进行，除非有特殊说明。
2. 与活细胞接触的器械和试剂都应该是无菌的，操作也必须是无菌操作。
来源：丁香实验
