表达蛋白检测实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

蛋白表达常用检测实验，包括免疫印迹法、免疫沉淀法、点印迹法等。

来源：丁香实验

操作方法

免疫印迹法-表达蛋白检测实验

1. 用生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞建立病毒感染细胞培养液（见基本方案 1 步骤 1~5）。 2. 用完全 MEM-5 培养基将 5×105 细胞/孔放入 6 孔组织培养板培养（每孔终体积为 2 ml）。直至细胞汇片生长（应小于 24 h）。 3. 在使用前，将一定体积的痘苗病毒储液与 0.25 mg/ml 胰酶混合，涡旋混匀。在 37℃ 水浴锅中保温 30 min，并在保温过程中每隔 5

免疫沉淀法-表达蛋白检测实验

1. 培养细胞，用病毒感染细胞（见基本方案 4 步骤 1～4）。 2. 加入 2 ml 的完全 MEM-5 培养基，按所选用启动子的类型决定培养时间：早期启动子为感染后的 1~6 h；晚期启动子为感染后的 4~20 h。 3. 吸出培养基，加入含有 25~50 mCi [35S] 蛋氨酸或 [35S] 半胱氨酸的 0.5 ml 完全不含蛋氨酸或半胱氨酸的 MEM-5 培养基和 35 μl 完全 M

点印迹法

1. 病毒感染细胞并完成筛选（见「痘苗DNA检测实验」中「PCR 法」步骤 1~9）。2. 轻轻刮下细胞，转移到离心管中，最大转速离心 30 s，弃培养基，用 200 μl PBS 重悬。24 孔培养板中的细胞也可用 1 ml 的注射器的活塞刮取。3. 冻融并超声细胞悬液（见「痘苗DNA检测实验」中「PCR 法」步骤 11、12）。4. 将硝酸纤维素膜剪至适合点迹仪大小，将其用水浸湿，放入仪器中，