请教RIPA的配制
丁香园论坛
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我的实验：将400ul的matrigel胶注入小鼠皮下形成的那么一个黄豆大的像凝胶一样的东西，会有血管长入。然后活体动物注射荧光素标记的Isolectin，可与新生血管内皮细胞结合，然后取出组织，溶解在RIPA裂解液中，匀浆后离心取上清再测定荧光强度。
该操作原文献只说用RIPA裂解液，没有给出成分。我用“RIPA”这个词检索，从一篇无关的英语文献中找到了配方。国内再查RPIA，共查到3-4种，大体成分均与英文文献相似，互相差1、2种成分或个别成分用量有一点差异，国内文献都是用来做Western的，而做Western我所在实验室只加PMSF， 没有leupetin、aprotinin、chynostatin等成分，配方就更简单了。不知我所在实验室只加PMSF，我的实验是否可用，省去aprotinin、leupeptin，经费是一方面，主要是眼下购买时间要1月以上，着急。
以下是我查到的几种RIPA的配制：
（1）英文：100μl RIPA buffer (20 mmol/L Tris-HC1, pH 7.4, 150 mmol/L NaC1, 1mmol/L EDTA, 1% NP-40, 1 mmol/L Na3VO4, 1 mmol/L PMSF, 5μg/ml leupetin, 5μg/ml aprotinin, 5μg/ml chynostatin).
After incubation for 30 min on ice, the lysis suspension was centrifuged at 12000r/min for 15 min at 4℃, and the supernatant was transferred to another tube and stored in aliquost......
（2）细胞溶于ＲＩＰＡ缓冲液(1×ＰＢＳ,体积分数为1%ＮＰ-40,5ｇ/Ｌ脱氧胆酸钠,1ｇ/ＬＳＤＳ,1ｍｍｏｌ/ＬＰＭＳＦ,10μｇ/ｍｌ抑肽酶,10μｇ/ｍｌ抑酶醛肽)20分钟(0℃),离心上清获蛋白。Ｂｉｏ Ｒａｄ试剂盒进行蛋白质定量。
（3）培养皿中加入1ml预冷的RIPA裂解缓冲液(Tris-HCl 50mmol/L pH8.0；NaCl 150mmol/L；DTT 1mmol/L；EDTA 0.5mmol/L；NP-40 1%；脱氧胆酸钠 5g/L；SDS 1g/L；PMSF 100mg/L；Leupeptin 2mg/L；钒酸钠 100μmol/L),冰浴条件......
（4）ＲＩＰＡ缓冲液(Tris-HCl 50mmol/L pH8.0；NaCl 150mmol/L；NP-40 1%；SDS 1g/L；0 5%ＤＯＣ, EDTA 2mmol/L；PMSF 1mmol/L；Leupeptin 10umol/L；pepstatinA1umol/L；aprotinin 1ug/ml)裂解细胞,冰浴30ｍｉｎ......
该操作原文献只说用RIPA裂解液，没有给出成分。我用“RIPA”这个词检索，从一篇无关的英语文献中找到了配方。国内再查RPIA，共查到3-4种，大体成分均与英文文献相似，互相差1、2种成分或个别成分用量有一点差异，国内文献都是用来做Western的，而做Western我所在实验室只加PMSF， 没有leupetin、aprotinin、chynostatin等成分，配方就更简单了。不知我所在实验室只加PMSF，我的实验是否可用，省去aprotinin、leupeptin，经费是一方面，主要是眼下购买时间要1月以上，着急。
以下是我查到的几种RIPA的配制：
（1）英文：100μl RIPA buffer (20 mmol/L Tris-HC1, pH 7.4, 150 mmol/L NaC1, 1mmol/L EDTA, 1% NP-40, 1 mmol/L Na3VO4, 1 mmol/L PMSF, 5μg/ml leupetin, 5μg/ml aprotinin, 5μg/ml chynostatin).
After incubation for 30 min on ice, the lysis suspension was centrifuged at 12000r/min for 15 min at 4℃, and the supernatant was transferred to another tube and stored in aliquost......
（2）细胞溶于ＲＩＰＡ缓冲液(1×ＰＢＳ,体积分数为1%ＮＰ-40,5ｇ/Ｌ脱氧胆酸钠,1ｇ/ＬＳＤＳ,1ｍｍｏｌ/ＬＰＭＳＦ,10μｇ/ｍｌ抑肽酶,10μｇ/ｍｌ抑酶醛肽)20分钟(0℃),离心上清获蛋白。Ｂｉｏ Ｒａｄ试剂盒进行蛋白质定量。
（3）培养皿中加入1ml预冷的RIPA裂解缓冲液(Tris-HCl 50mmol/L pH8.0；NaCl 150mmol/L；DTT 1mmol/L；EDTA 0.5mmol/L；NP-40 1%；脱氧胆酸钠 5g/L；SDS 1g/L；PMSF 100mg/L；Leupeptin 2mg/L；钒酸钠 100μmol/L),冰浴条件......
（4）ＲＩＰＡ缓冲液(Tris-HCl 50mmol/L pH8.0；NaCl 150mmol/L；NP-40 1%；SDS 1g/L；0 5%ＤＯＣ, EDTA 2mmol/L；PMSF 1mmol/L；Leupeptin 10umol/L；pepstatinA1umol/L；aprotinin 1ug/ml)裂解细胞,冰浴30ｍｉｎ......
