能否在一个表达载体里插入两个蛋白实现同时表达

完全可以，楼主所说共表达不是融合表达，是共同表达。 如果是真核表达，把两个表达框构建到一个载体上进行转化或转染就可以实现共表达了,有一些现成的用于共表达的载体。动物细胞中还有IRES载体可用于共表达。 如果是大肠杆菌或其他原核生物共表达，可以构建两个顺反子到一个载体上，但是步骤可能会比较多，载体比较大，可能会影响质粒复制而影响表达效果。而如果两个顺反子有较大同源部分，则还需要考虑因重组导致的不稳定。 Novagen新出的一款载体pETDuet-1，使用两个T7启动子、两个RBS分别表达两个基因，不过只有一个T7终止子，可以满足楼主的需要。并附质粒图谱。

当初没有好好学习，书到用时方恨少啊 -------------------1．“乳糖操纵子”的基本组成 1．1 结构基因群 　　操纵子中被调控的编码蛋白质的基因称为结构基因(structural gene, SG)。一个操纵子中含有2个以上的结构基因，多的可达十几个，各结构基因头尾衔接、串连排列，组成结构基因群。 乳糖操纵子含有Z、Y和A共3个结构基因。Z基因长3510bp，编码含1170个氨基酸、分子量为135,000的多肽，以四聚体形式组成有活性的β-半乳糖苷酶，催化乳糖转变为别乳糖(allolactose)（也称异乳糖），再分解为半乳糖和葡萄糖；Y基因长780bp，编码有260个氨基酸、分子量为30,000的半乳糖透过酶，促使环境中的乳糖进入细菌；A基因长825bp，编码275氨基酸、分子量为32,000的转乙酰基酶，以二聚体活性形式催化半乳糖的乙酰化。Z基因5＇侧具有大肠杆菌核糖体识别结合位点（ribosome binding site，RBS）特征的Shan-Dagano(SD)序列，因而当乳糖操纵元开放时，核糖体能结合在转录产生的mRNA上。由于Z、Y和A 3个基因头尾相接，上一个基因的翻译终止码靠近下一个基因的翻译起始码，因而同一个核糖体能沿此转录生成的多顺反子（polycistron）mRNA移动，在翻译合成了上一个基因编码的蛋白质后，不从mRNA上脱落下来而继续沿mRNA移动合成下一个基因编码的蛋白质，依次合成这个基因群所编码所有的蛋白质。 1．2 启动子 　　启动子(promoter，P)是指能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。操纵子至少有一个启动子，一般在第一个结构基因5＇侧上游，控制整个结构基因群的转录。 　　虽然不同的启动子序列有所不同，但比较已经研究过的上百种原核生物的启动子的序列，发现有一些共同的规律，它们一般长40-60bp，含A-T碱基对较多，某些段落是很相似的，这些相似的保守性段落称为共有性序列(consensus sequences)。启动子一般可分为识别（R，recognition）、结合（B，binding）和起始（I，initiation）三个区段。转录起始第一个碱基（通常标记位置为+1）最常见的是A；在-10bp附近有TATAAT一组共有序列，因为这段共有序列是Pribnow首先发现的

pBudCE4.1 可以做为 真核共表达载体