【求助】表达载体构建

您好，我是新手，我想在细胞中导入wnt1基因，希望基因导入后能够稳定表达，在参考文献上看到HA-tagged Wnt1 expression vector (pHA-Wnt1），是如何构建的？怎样转染进入细胞？其中PHA其中是什么？质粒吗？还是。。。

PHA是质粒。先得到目的基因，再连接到载体上，转染即可

更确切的说，pHA应该是一个带有HA的标签（tag）的载体（可能是作者自己构建的），wnt1基因通过克隆、酶切以及连接到这个载体的多克隆位点从而使得HA和wnt1能够在转染后融合表达。转染的方法多种多样，钙转、脂质体、PEI等等都可以，反正商业化的转染试剂很多的，甚至于病毒感染。如果这个载体上带有筛选标记，比如neo，就可以通过G418进行筛选从而获得稳定表达wnt1的过表达细胞株。

谢谢啊

请问常用与载体连接的标签有哪几种？标签是购买还是自己做？我想用lipo2000转染使wnt1导入目的细胞，逐步筛选等到稳定表达wnt1的细胞系可以吗？

你好！标签有很多种，最主要是要看你喜欢用什么标签，如His,FLAG等，标签是你在做克隆的时候加上去的，但Anti-His或Anti-FlAG的抗体要自己去购买的，如果载体上有抗生素的筛选标记，如Neomycin,Blasticidin等，就可以用抗生素去筛选稳转细胞株，如果没有的话，可能只能用慢病毒或逆转录病毒来做了，一般来说用病毒来做稳转细胞株效率要比质粒瞬转高100倍以上。junhuang@biowit.com

其实可以找分子生物学公司做的