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蛋白互作-免疫共沉淀

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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畅月十一

  1. 已知A-B-C三个蛋白相互作用(A连B,B连C),那有没有办法把一个体系内的所有互作的ABC蛋白全部得到呢?
  2. 或者,我有3个组,想比较每个组的每个体系中互作ABC蛋白的量,我应该用什么方法呢,如果我用coip,那我加大ip抗体和琼脂糖珠子的量会不会得到全部的互作ABC蛋白呢?
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3 个回答

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sswei

有帮助

蛋白质-蛋白质相互作用是指两个或两个以上的蛋白质分子通过非共价键形成 蛋白质复合体的过程。

蛋白质与蛋白质之间的相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分,对调控细胞及其信号有重要意义。

蛋白质互作研究按照实验目的可分为两大类,一是验证两个蛋白是否存在相互作用,二是筛选某个兴趣蛋白的互作蛋白。

据此是可以通过共价键形成ABC蛋白。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可以溶解肽分子之间的氢键把三者分开,在那之前需要先确定三部分各自的功能域

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畅月十一user-title

  1. A在内质网膜上,C在线粒体外膜上,B在内质网和线粒体之间
  2. 除了相互作用的ABC蛋白,这3 个蛋白还存在游离的,如果我把他们3个分开,那测出来的结果就不只是互作的ABC蛋白了
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loveliufudan

有帮助

1.有可能。您可以尝试利用蛋白质交联技术,如形成二聚体的交联剂,将A、B、C三个蛋白质交联在一起。接着可以使用亲和纯化、凝胶过滤层析或其他蛋白质纯化技术,如磷酸化蛋白质纯化,将交联的三个蛋白质一起纯化,从而得到这些蛋白质的全部互作体系。需要注意的是,交联条件需要经过优化,以避免交联产生的影响影响到蛋白质的性质。

2.对于比较每个组的每个体系中互作ABC蛋白的量,您可以使用共免疫沉淀(co-IP)技术。通过添加相应的抗体和琼脂糖珠子,可以富集含有ABC蛋白质的蛋白质复合物。您可以根据您需要比较的目的,调整IP抗体和琼脂糖珠子的量,来获取想要的蛋白质复合物。需要注意的是,共免疫沉淀法在特定的条件下可以检测到许多蛋白质相互作用,但也可能出现假阳性和假阴性的情况,所以需要在实验中控制实验条件并进行多次重复实验以提高数据的可靠性。

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畅月十一user-title

  1. 那如果使用交连剂,应该使用什么交连剂呢?您有相关推荐吗?
  2. “添加相应的抗体和珠子”,我能不能每个组每个样加的珠子和抗体量都一样呢,只要过量就行,因为我的目的其实和第一点的目的是一样的,都是为了得到整个体系里的所有互作ABC蛋白
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