dxy_xr7grklw
跑的是磷酸化的SRC,内参很好,没啥事,也加了磷酸酶抑制剂了
sswei
背景黑可能有以下几个原因:
1.没有封闭好,但这个可能很小
2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例
3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长
毛利小五郎的徒弟
背景太高,抗体浓度太大的原因。
loveliufudan
以下是可能的一些原因:
过度曝光:如果将蛋白质样品暴露在过高的光强下,会导致背景过度暗淡。您可以尝试减少暴露时间或降低光强来解决此问题。
样品准备问题:如果样品中存在过多的杂质或未被彻底清洁干净,可能会导致背景过度暗淡。您可以尝试更仔细地清洁您的试管、移液器等,或更改您的样品制备方法。
抗体结合问题:如果抗体与蛋白质样品结合不充分或者结合了不应结合的蛋白质,可能会导致背景过度暗淡。您可以尝试优化抗体的使用浓度或更换抗体,确保其与目标蛋白的结合特异性。
蛋白质样品的数量问题:如果蛋白质样品过少或者过多,可能会导致背景过度暗淡。您可以尝试优化蛋白质的用量来解决此问题。
膜污染:如果使用的膜污染或老化,可能会导致背景过度暗淡。您可以尝试更换新的膜或者对膜进行更好的保存。