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科研学霸天团，48小时有问必答

问请求专业人士解答内含子lncRNA

Miracle星

lncRNA 的生物功能lncRNA作用范围广泛，机制非常复杂，为了方便大家的理解，我们来简单看看lncRNA的特点：1. 在编码蛋白基因的上游启动子区转录，干扰邻近蛋白编码基因的表达2. 与编码蛋白基因的转录本形成互补双链，调控基因的表达水平3. 结合在特定蛋白质上调节相应蛋白的活性4. 作为小分子RNA的前体分子或者miRNA反义抑制分子5. 作为结构组分与蛋白质形成核酸蛋白质复合体lncRN

3 回答143 围观

问洗涤RNA沉淀倒上清时候，倒不干净，我可以用枪头吸吗？

Junego

可以，少量残留液用干净小枪头吸，不同样品之间记得换枪头。

6 回答135 围观

问体外转录，模版DNA必须是双链吗，单链DNA可以作为模版吗？

汤姆卜丽波

是以一条含有启动子的链为模板的，但是转录是应该还是要双链

4 回答121 围观

问为提取结核杆菌的RNA，如何破壁？

未来9

可以采用超声波联合Trizol法、玻璃珠(简称"玻珠")联合Trizol法(简称"玻珠法")和Trizol法(简称"不加玻珠法"),对结核分枝杆菌进行破壁,提取总RNA

3 回答170 围观

问提rna时，检测rna浓度时测量的260/280以及260/230数值对后续逆转录以及扩增有影响吗

Junego

RNA产量符合预期的情况下，质量看两点：1.OD260/280为1.8-2.1，OD260/280为2-2.52.可以跑核酸胶，看RNA的完整性，好的RNA一般有3条带：依次是28S、18S、5S，28S亮度是18S的两倍。5S可能比较暗，也是正常的。以上两点没问题，就可以做逆转录以及PCR扩增了。

5 回答5443 围观

问RNA提取结果，遭遇亮区干扰，咋办(・o・)

bamboopiggy

你跑的是动物组织还是植物组织？用的是变性胶还是非变性胶？尝试用RNase处理一下看看还有没有，如果没有，可能是28S降解，如果有，可能是DNA或蛋白质污染。

3 回答107 围观

问在对细胞株进行敲低时，设置多组敲低序列是排除脱靶效应（off-target effect）么？如果没有做多组敲低，应该怎么弥补？

balalaLy

赶紧补呗，常规都是做三组，确保有两组以上能用。

3 回答163 围观

问提RNA的时候，有的步骤是加完trizol直接加氯仿，有的是加完trizol后离心吸取上清再加氯仿，这两种方式有差别吗

bamboopiggy

加完trizol以后，直接加氯仿就好，反正也要离心。加了trizol后，离心，是为了去除没有被trizol裂解的组织，再加氯仿，还是要离心的。

3 回答171 围观

问反转录时，对于长片段，使用oligodT好呢，还是特异性引物好呢？

天一湖医者

一般情况简单地说你的目的mRNA有playA尾，且基因较小2000bp以内吧都可以选择oligo dT；但如果你的目的mRNA没有playA尾或者你的基因较大时，由于RT酶的扩增能力问题就要用随机引物。

3 回答149 围观

问外泌体提取rna后，检测内参不齐，需要引入外参吗？

bamboopiggy

可以引入外参，但是要满足以下条件:1. 与待检的目的RNA在样本中具有一样的存在形式，即囊泡包裹状态存在；2. 在外泌体分离富集过程中与待检外泌体RNA具有一样的动力学行为；3. 在外泌体RNA提取及PCR检测过程中具有一样的效率。也即可以完整的模拟目的基因在整个液体活检过程中的动力学变化。

2 回答210 围观

问如何提高提取RNA纯度，避免提取过程中的酚残留？

bamboopiggy

酚与氯仿均起到变性的作用。酚的变性能力强于氯仿，但酚与水有一定的互溶，因此酚抽后，除可能损失部分核酸外，水相中还会残留酚，而酚的存在将对核酸的酶反应产生强的抑制，因此在操作中可单用氯仿作变性剂、也可用酚/氯仿混合变性，也可用单一酚作变性己，但用单一酚后在有机溶剂沉淀时一定要用氯仿重抽提。

2 回答230 围观

问病料存放旧后测rna数值偏差大是操作不当还是污染可能性大？

迟C迟

样品放久了测OD不准，可能是RNA已经降解了，测出来估计是污染了。

3 回答117 围观

问电泳结果中出现纵向条纹的可能原因是什么？

bamboopiggy

样品中盐的浓度高了，可能需要换lysis

3 回答130 围观

问抗炎药效学实验，提RNA

府宅

可能是RNA降解了，RNA变成单核苷酸了，就测不出

3 回答210 围观

问请问，在提取RNA ,跑琼脂糖凝胶电泳只能跑出两条带，反转录后最为模板影响定量的结果吗？

bamboopiggy

一般会看到28s和18s两条带。28s是18s的两倍就可以，一般5s是看不清楚的。所以继续往下做吧，没问题

4 回答137 围观

问石蜡包埋切片过程中，4%PFA浸泡组织的时间要求，至少24小时吗？

Topmicro

由你的试验目的决定，随着固定时间的延长对组织抗原的检出强度将逐渐降低，过度延长固定时间，易引起细胞内生物大分子过度交联。

5 回答139 围观

问各位大佬，鉴定大肠杆菌O抗原血清除了凝集法，还有其他快速的方法吗？

dxy_gwrp7ndq

酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行检查。

3 回答113 围观

问用trizol提取总RNA时，在加入氯仿前的步骤都可以放在置于冰上的板子室温静置么？组织加入裂解液后室温放置与插入冰块中有区别么

府宅

上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,其余步骤在冰上操作

3 回答259 围观

问难消化的新鲜组织提取出的RNA建库后QPCR不合格，有什么方法可以改善？

bamboopiggy

1.将你的组织，直接放到trizo里，再进行剪碎。2.用液氮将组织冻住后，研钵内弄碎后，再加入trizol。3.买个组织提取rna的kit，可以试试。

3 回答98 围观

问【求助】提组织RNA时，为何OD值总是小于1.8

迟C迟

RNA 260/280<1.8说明有蛋白质、酚的污染。

6 回答589 围观

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