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科研学霸天团,48小时有问必答
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体外转录问题
毛利小五郎的徒弟
理论上多克隆酶切位点会影响后续加帽和转录过程,而且多克隆酶切位点会造成干扰
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求助DMSO溶解药物与稀释问题
balalaLy
一般不溶于水的物质用纯水或pbs稀释之后都会析出,可以按照说明书的建议进行溶解,或参照其它类似的物质使用助溶剂比如PEG和吐温进行稀释
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小白求翻译
Dr_劉医生
发夹适配器,一种DNA双链的连接方式,类似发卡(如图片两端)
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问
我要提不同龄(1至4龄、蛹、成虫)的RNA,各阶段昆虫要如何取样?按重量取还是按头数取?
Dr_劉医生
按头数取,提RNA的组织和每个个体相关,和重量没关系,
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问
小鼠滑膜成纤维原代提取
balalaLy
胶原酶消化的还好吧,消化完没有用筛子筛吗?好多组织块。不筛的话也可以通过短时间静置之后取上清,去掉沉淀的组织块。
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问
提RNA之后,跑胶如图,想问一下是什么原因呢?(maker是一万的)
Dr_劉医生
从图片看用的是Trizol沉淀法跑的电泳图,电泳条带都没分开,marker浓度太高了,一般超过5000ng/UL就很难跑开;可以适当减少上样的量或稀释浓度
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问
RNA电泳降解
灵枢天问
怎么说呢,我也就跑成这样,不可避免的
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问
RNA提取
drzzzxxxx
od值只是反应纯度,和rna质量有什么关系?上面几个人真的是误人子弟,你要验证有没有降解就跑个胶,看28s,18s,5s,引物没问题的情况下,内参ct只大很有可能就是降解了。
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问
非哺乳动物注射dsrna要多做几对引物,组成dsrna鸡尾酒吗?
汤姆卜丽波
可以多设计几组然后分别注射看那一组效果好一些
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问
植物的rna为啥提取出来纯度每次都很低
illusio
可能是有蛋白污染了,也有可能是乙醇没有吹干就溶解了,也有可能是样本本身不是很好,有脂肪、糖等的污染。可以纯化一下看看
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用来提RNA的组织样本可以在-20放多久?
陈皮712
最好1周内用完,或者放到-80冰箱、液氮以便长期保存。如果只有-20冰箱,可以在组织中加入组织保存液(很多公司有生产,不是很贵)。
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问
细胞长满但是提的RNA浓度低
陈皮712
RNA的质量还行,浓度偏低,但这个浓度也可以继续往下做。不知道你是用Trizol法还是柱法,如果是柱法提取,RNA浓度会比较低,但纯度会更好。Trizol法提取RNA的浓度会比较高,但杂质也相对较多。Trizol法用得更多一些。首先,加入Trizol后,T25瓶的细胞倒掉培养基,不用PBS清洗,直接加0.8-1ml Trizol,铺瓶,放4度冰箱充分裂解10分钟。然后,开一把新的细胞刮刀,充分刮,
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提取RNA扩增后质控起不来内标也起不来
Topmicro
检查一下用的引物是不是有问题。
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问
求助|如何通过ensembl代码如何查找相应的lncRNA
bamboopiggy
如果技术说他们数据库里没有,估计就是还没有命名的,你就是查也查不到,还不如看看那些有名字的,你有没有能用的。
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RNA高温变性后电泳会变成很多条带么?为什么?
Eason老歌迷
可能是你的样品中rna在高温中都碎裂了,成小片段了
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问
mirna慢病毒注射动物实验要注射几次?
Eason老歌迷
纯化过腺病毒:1-5×109毒量注射(1),比如纯化腺病毒滴度为1×1011PFU,则每只小鼠注射体积约为10-50ul。浓缩慢病毒:1-5×107毒量注射,如慢病毒滴度为1×10 8PFU/ml,则小鼠理论上注射100-500ul,实际上每次注射体积有严格要求(见下方),所以如果量不够,需要分多次注射,每次注射至少间隔1-2天。每只小鼠病毒注射体积:注射体积不要超过200ul,最好控制在100u
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求助:原代细胞提取,酶消化完离心无沉淀
Eason老歌迷
应该是有一个小圆白点。可能是你选取的组织提取的细胞太少了,也可能是酶消化时间太长了。
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问
化学合成的siRNA转染细胞时阴性对照的作用是什么,怎么设计的阴性对照
Eason老歌迷
可以设计一个空转细胞当阴性对照。
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问
RNA的检测
Topmicro
你有没有做阴性对照,看看每次的阴性对照一样吗
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问
药物通过miRNA发挥作用,动物分组该咋整?
balalaLy
control组,药物治疗组,miRNA干预组,药物+miRNA组。
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